- •Общий белок сыворотки крови
- •Нормальные значения общего белка сыворотки крови
- •Клиническое значение определения общего белка сыворотки крови
- •Гиперпротеинемия
- •Гипопротеинемия
- •Литература:
- •Методы определения общего белка в сыворотке крови
- •Методы определения общего белка
- •Азотометрические методы
- •Гравиметрические методы
- •«Преципитационные» методы
- •Спектрофотометрические методы
- •Рефрактометрические методы
- •Колориметрические (фотометрические) методы
- •Другие методы определения общего белка сыворотки крови
- •Материал для исследования
- •Ход определения общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции
- •Литература:
- •Мочевина
- •Биосинтез мочевины
- •Весь цикл мочевинообразования можно представить следующим образом:
- •Выведение мочевины
- •Нормальные значения мочевины в крови и моче
- •Литература:
- •Мочевина в крови. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в крови
- •Нормальные значения мочевины в крови
- •Повышение уровня мочевины в крови
- •Снижение уровня мочевины в крови
- •Литература:
- •Мочевина в моче. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в моче
- •Нормальные значения уровня мочевины в моче
- •Повышение уровня мочевины в моче
- •Снижение уровня мочевины в моче
- •Литература:
- •Методы определения мочевины
- •Биологический материал, используемый для определения мочевины
- •Литература:
- •Газометрические методы определения мочевины
- •Литература:
- •Фотометрические методы определения мочевины
- •Литература:
- •Ферментативные (уреазные) методы определения мочевины
- •Ферментативные колориметрические методы определения мочевины по конечной точке
- •Уреазные методы определения мочевины с использованием сопряженных ферментативных реакций
- •Потенциометрические методы определения мочевины
- •Методы определения мочевины с использованием технологии «сухой химии»
- •Литература:
Литература:
Слепышева В. В., Балябина М. Д., Козлов А. В. - Методы определения мочевины
Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. - Москва, "Медицина", 1987 г.
Фотометрические методы определения мочевины
Фотометрические методы определения мочевины основаны на реакции мочевины с различными веществами с образованием окрашенных соединений.
Среди фотометрических методов определения мочевины наиболее распространенными являются методы, основанные на реакции мочевины с диацетилмонооксимом (диацетилмонооксимная реакция, реакция Ферона), протекающей в два этапа.
На первом этапе диацетилмонооксим расщепляется до диацетила и гидроксиламина. На втором этапе диацетил в кислой среде вступает в реакцию конденсации с мочевиной с образованием окрашенного комплекса. Величину его поглощения регистрируют при 550 нм, либо по его способности к флюоресценции при 415 нм.
Изменению окраски и стабилизации комплекса способствует использование ряда соединений или удаление из реакции образующегося при гидролизе гидроксиламина. Для окисления гидроксиламина могут применяться следующие вещества: персульфат калия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, катионы, феназон. Для интенсификации окраски и повышения ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан и нитриты.
Диацетилмонооксимную реакцию адаптировали для определения мочевины в моче и сыворотке крови. Основной недостаток этого метода — светочувствительность комплекса и быстрое снижение его окраски. Другим недостатком является токсичность реактивов для проведения данной реакции.
Однако, несмотря на имеющиеся недостатки, методы этой группы отличаются хорошей воспроизводимостью, высокой чувствительностью, большой специфичностью. В некоторых методах используется 20 — 50 мкл сыворотки, что позволяет применять их без депротеинизации сыворотки.
Диацетилмонооксимный метод определения мочевины утвержден в качестве унифицированного.
Литература:
Слепышева В. В., Балябина М. Д., Козлов А. В. - Методы определения мочевины
Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. - Москва, "Медицина", 1987 г.
Ферментативные (уреазные) методы определения мочевины
Ферментативные методы определения мочевины приобрели наибольшее распространение в современной клинико-лабораторной практике. Эти методы определения мочевины называются также уреазными, так как в них в качестве реактива используется фермент уреаза. Для уреазы мочевина является единственным физиологическим субстратом, поэтому уреазные методы высокоспецифичны.
При сборе материала для исследования следует помнить, что фторид ингибирует уреазную реакцию. В связи с этим методы, основанные на использовании уреазы, не могут использовать образцы крови с добавлением фторида. Кроме того, для уреазных методов не может использоваться в качестве антикоагулянта аммониевая соль гепарина.
Ферментативные методы определения мочевины достаточно многочисленны, но все состоят из двух этапов. Первый этап - общий для всех уреазных методов. Суть его заключается в том, что под действием уреазы происходит гидролиз мочевины до аммиака. На втором этапе определяется концентрация аммиака, образовавшегося на первом этапе. В зависимости от используемых способов регистрации концентрации аммиака, ферментативные (уреазные) методы определения мочевины можно разделить на следующие группы:
колориметрические по конечной точке,
методы с использованием сопряженных ферментативных реакций,
потенциометрические,
методы с использованием технологии «сухой химии».