Преимущества вэжх

• Высочайшая селективность

• Надежность результатов

• Многокомпонентность анализа

• Низкие пределы обнаружения (0.1 мкг/л)

• Широкий диапазон линейности (1­1000 мкг/л)

• Малый расход пробы (1 мл)

• Экспрессность анализа

• Простота эксплуатации и возможность полной автоматизации

^Варианты ВЭЖХ

*Нормально-фазовая хроматография- подвижная фаза менее полярная, чем неподвижная фаза

*Обращенно-фазовая хроматография- подвижная фаза более полярная, чем неподвижная фаза

Обращенно-фазовая

хроматография

п / \

Полярный растворитель

►

Нормально-фазовая

хроматография

п / \

Неполярный растворитель

►

Схема жидкостного хроматографа

Г
с	■
■	(

Резервуар с элюентом Насос (блок подачи ПФ)

Инжектор (блок ввода пробы) Хроматографическая колонка Детектор

Блок регистрации (управления, обработки)

Дополнительные блоки:

Дегазирующее устройство

Автосамплер

Термостат колонок

Коллектор фракций

Пред- и/или постколоночный реактор

хроматографических систем

Е мкость с элюентом

Ввод пробы

Жидкостный хроматограф lc-10

(SHIMADZU)

>V-

Жидкостный хроматограф lc-20

(SHIMADZU)

Модульный жидкостный хроматограф ЛЮМАХРОМ

Г осреестр СИ РФ №30350-08

Жидкостный хроматограф ЛЮМАХРОМ Базовый блок на основе насоса ПИТОН-3, детекторы:

• фотометрический (254 нм)

• спектрофотометрический (190-360 нм)

• флуориметрический (фильтровый)

• спектрофлуориметрический

* Модульный жидкостный хроматограф ЛЮМАХРОМ

ГосреестрСИ РФ №30350-05

Фотометрический тор флуориметрический Базовый Спекторофлуориметрический

детектор детектор блок детектор Люмахром СФЛД 2310

Люмахром ФД 3110 Люмахром ФЛД 2410 Флюорат-02-Панорама

Флюорат-02-2М

спектрометр

Способы подачи подвижной фазы

• 1. Изократический режим-состав подвижной фазы не изменяется во время всего процесса хроматографирования;

• 2. Градиентный режим-состав подвижной фазы изменяется по специальной программе для достижения более эффективного разделения компонентов смеси

ПОДВИЖНАЯ ФАЗА (ПФ)

• Функции:

^Перемещение зоны компонента по колонке (транспортная)

Участие в процессе разделения

Требования к растворителям - компонентам ПФ:

Чистота , отсутствие механических примесей

^Химическая инертность (по отношению к сорбенту и аналитам)

^Совместимость с детектором

Очень важно:

ПФ должна быть обязательно отфильтрована и

дегазирована!

• ПФ для анализа в ВЭЖХ

Обращено-фазовая хроматография

• Подвижная фаза более полярная, чем неподвижная фаза

• Ацетонитрил-вода

• Метанол-вода

• Тнсжф¹"

• Фосфатные буферы, уксусная кислота

Нормально­фазовая хроматография

• Подвижная фаза менее полярная, чем неподвижная

• Подвижная фаза: гексан + этила цетат, хлороформ

• (недостаток-содержат влагу)

Насос

(блок подачи ПФ (здюентз))

Требования к насосу:

• химическая инертность по отношению к ПФ

• высокое рабочее давление

• высокая стабильность скорости потока

• отсутствие пульсаций

Тип жидкостной хроматографии	Расход элюента, мл/мин
Стандартная аналитическая	0,2 - 5
Аналитическая микроколоночная	0,001 - 0,25

УСТРОЙСТВО ПЕТЛЕВОГО ДОЗАТОРА ДЛЯ ВЭЖХ

Входноесныерстие

для иглы

I Oi насоса

Петля

Колонки и предколонки

Нормально-фазовая хроматография

Неподвижная фаза: силикагель, оксид алюминия

OH---OH OH

^{водород-связанные} силоксановые силанольные ^группы группы группы

Обращенно-фазовая

хроматография

Неподвижные фазы

химически модифицированные силикагели: С2, С4, С8, С16, С18, С22, С30

Обращенно-фазовая хроматография

Подвижная фаза более полярная, чем неподвижная фаза, первым из колонки выходит более полярное соединение

О о CI о о

Silica Surface Alkyl Si I a ne Reagent Silica Surface w/ Alkyl Chain

Неподвижные фазы

химически модифицированные силикагели: радикалы: цианопропил, аминопропил, оксипропил (слабополярные)

С2,С4, С8, С16, С18, С22 ,фенил (неполярные)

рН от 2-9, лучше 3-7 ³⁵

Схематическое изображение сорбентов с химически

связанными фазами

Потеря привитой связи за счет гидролиза силоксановых связей при

рН<3.

Полное растворение силикагелевой матрицы при рН>8.

ДЕТЕКТОРЫ

Спектрофотометрический

Ф

Рефрактометрический

люориметрический

Масс-спектрометрические детекторы Agilent

ДДМ

Д

Agilent 1200

Шимадзу

SPD-M20A

иодноматричный детектор. Диапазон длин волн 190 - 800 нм. Количество диодов 512; измерительная ячейка: проточная, термостатируемая. Возможность создания библиотек спектров, возможность комплектации библиотекой спектров. Библиотека УФ-спектров экотоксикантов для детектора диодная матрица включает 2682 UV спектра веществ, важных для токсикологии: наркотики, лекарственные препараты, вызывающие зависимость, антиэпилептики, важнейшие классы лекарств (анальгетики, стероиды, антибиотики, антигистаминные и др.), растительные яды, пестициды, фунгициды, гербициды, ПАУ, ПХБ и др. экологические загрязнители.

Оптическая часть УФ-детевстора с перестраиваемой Л/1ИНОЙ волны.

1 - рабочий фотодиод;

2. проточная ячейка;

3. фотодиод сравнения,

*4- дифрг»*г циои ная решетка;

5. зеркало;

6. оптический фильтр,

7. дейтериевая лампа

Оптическая масть» детектора с фотодиодной л пне и кои

дейтеривая лампа;

2. линзы;

3. заслонка;

4. проточная ячейка;

5. диодная матрица;

6. дифракционная рещеггка.

Формула расчета содержания витамина г- исслзд'уемом соединении.

1'де

Pst-C

Psb- площадь пика испытуем . го раствора витамина; F*st- площадь пика стандартного р^^гзора;

F- фактор разведения; с- навеска препарата, мг;

/V- навеска стандартного вещества, мг;

В- масса 1 таблетки, мг.

Трехмерная диаграмма с фотодиодной матрицей при определении фенантрена.