Ярославская государственная медицинская академия

кафедра общей хирургии

Методические рекомендации для преподавателей студентов к практическому занятию по теме:

“Иммунологические основы трансфузиологии. Определение групп крови. Основные функции крови”

Автор: Доцент А.Г.Козлов

 

1. ВВЕДЕНИЕ

Переливание компонентов крови оказывает многообразное влияние на организм больного, которое часто невозможно заменить никакими другими средствами. Оно является основным лечебным мероприятием в борьбе с гипоксией, анемией, гипопротеинемией и при острой кровопотере. Врач любой специальности в своей профессиональной деятельности обязательно сталкивается с переливанием компонентов крови.

Переливание компонентов крови при условии соблюдения всех требований, изложенных в соответствующих инструкциях, является безопасным лечебным методом. С другой стороны, осложнения, возникающие при проведении этой процедуры, имеют тяжелые последствия и несут реальную угрозу для жизни больного.

Переливание компонентов крови является врачебной процедурой, выполняющий её несет личную юридическую ответственность за свои ошибки и возникающие осложнения.

Студент должен усвоить не только теоретические аспекты проблемы, но и научиться практически выполнять все пробы, проводимые перед и во время переливания компонентов крови, овладеть техникой трансфузии.

2. Цель занятия:

- ознакомить студентов с основными понятиями о групповых свойствах человеческой крови и реакции изогемагглютинации,

- обучить студентов методике определения групп крови в системе АВ0 и резус-фактора,

- обсудить возможные ошибки и сформировать навыки предупреждения несовместимости, крови по системе АВ0 и резус,

- разобрать основные функции крови и на этой основе сформулировать показания и противопоказания к переливанию компонентов крови.

3. Студент должен знать:

1. Современное учение о группах крови.

2. Принцип реакции изогемагглютинации.

3. Условия, оснащение, технику определения групп крови.

4. Значение резус-фактора. Методы его определения.

5. Значение и технику пробы на индивидуальную совместимость.

6. Значение и технику пробы на совместимость по резус-фактору.

7. Значение и технику биологической пробы.

8. Основные функции крови.

4. Студент должен уметь:

1. Определить группу крови простой реакцией.

2. Определить группу крови двойной реакцией.

3. Исключить неспецифическую агглютинацию.

4. Определить резус-фактор экспресс методом.

5. Определить резус-фактор методом конглютинации с применением жела­тина в пробирках с подогревом.

6, Провести пробу на индивидуальную совместимость по системе АВ0.

7. Провести пробу на совместимость по резус-фактору.

8. Провести биологическую пробу.

9. Установить показания к переливанию компонентов крови.

10. Оценить возможные противопоказания.

5. Блок информации

Групповые свойства человеческой крови были открыты в начале прошлого века К.Ландштейнером и Я.Янским в 1901-1907гг. Благодаря этому удалось воздать серологические основы для переливания крови. Группы крови зависят, как оказалось, от необыкновенно мелких субстанций, находящихся на поверхности эритроцитов - агглютиногенов, названных А, В и 0, и антиэритроцитарных антител - агглютининов альфа (α) и бета (β), содержащихся в сыворотке крови. Агглютиногены, являясь частью клеточной структуры эритроцита содержатся также в лейкоцитах и тромбоцитах, кроме того, они обнаружены во многих тканях и органах (мышцы, желудочно-кишечный тракт, селезенка, почка и другие органы).

Групповые изоантитела (агглютинины) представляют собой молекулы гамма глобулина, обладающие способностью специфично соединяться с одноименными агглютиногенами крови, т.е. при встрече агглютиногена А и агглютинина альфа или агглютиногена В и агглютинина бета происходит реакция агглютинации. Реакция антиген-антитело в реакции агглютинации и является основой серологической диагностики групп крови.

Группу крови человека определяют на основании наличия агглютиногена в его эритроцитах, в сыворотке крови человека с данной группой крови имеются агглютинины, которые не взаимодействуют с его агглютиногенами (согласно закону Ландштейнера). Исключением из закона Ландштейнера практически являются только новорожденные, так как изоагглютинины вырабатываются в течение первых шести месяцев жизни. Титр их уменьшается в старческом возрасте. Изучение уровня изоагглютининов в зависимости от возраста человека показывает, что он является наиболее высоким в третьей декаде жизни и может уменьшаться под влиянием некоторых заболеваний. В противоположность изоагглютининам, групповые антигены (изоагглютиногены) имеются в эритроцитах новорожденных сразу после рождения.

На основе этих данных было сформулировано понятие: группа крови системы АВ0. Считается, что в системе АВ0 агглютинин альфа соединяется только с агглютиногеном А, а агглютинин бета - только с агглютиногеном В. Агглютиноген 0 является слабым антигеном, выявляется только специальными методами исследования и практического значения не имеет. Реакция агглютинации эритроцитов одного человека под влиянием сыворотки крови другого называется изогемагглютинация.

Согласно современной классификации выделяют четыре группы крови сис­темы АВ0:

В I группе крови в эритроцитах отсутствуют агглютиногены, а в сыворотке имеются оба агглютинина альфа и бета, формула крови записывается I(0)αβ Сыворотка крови этой группы агглютинирует (склеивает) эритроциты всех других групп, кроме принадлежащих к этой группе. Эритроциты I группы никакой сывороткой не склеиваются.

Во II группе эритроциты имеют один агглютиноген А, сыворотка содержит один агглютинин бета, формула крови записывается II(А)β. Сыворотка крови этой группы агглютинирует эритроциты III группы, но не агглютинирует эритроциты I и II групп. Эритроциты II группы агглютинируются сыворотками I и III групп.

В III группе крови эритроциты имеют один агглютиноген В, сыворотка содержит один агглютинин альфа, формула крови записывается III(В)α. Сыворотка крови этой группы агглютинирует эритроциты II группы и не агглютинирует эритроциты I и III групп, эритроциты III группы агглютинируются сыворотками I и II групп.

В IV группе крови эритроциты имеют оба агглютиногена А и В, сыворотка вообще не cодержит агглютининов, формула крови IV(АВ)0. Сыворотка крови I группы вообще не агглютинирует эритроцитов, эритроциты же этой группы агглютинируются сыворотками других трех групп.

В наше время принято обозначать группы крови по содержанию агглю-тиногенов эритроцитов цифрой и буквой: I(0), II(А), III(В), IV(АВ).

Групповые свойства АВ0 крови человека не изменяются в течение жизни, а так же не подвергаются другим изменениям. Химические факторы (лекарства) и заболевания не изменяют свойств изоагглютининов. Определение "группы крови" является очень широким и не ограничивается представлением об антигенах эритроцитов, в настоящее время известно более 300 различных антигенов крови человека. Так в 1911г. было установлено, что агглютиноген А имеет разновидности А₁ и А₂ т.е. во II и IV группах можно выделить подгруппы, содержащие А₁ или А₂ агглютиногены и таким образом можно говорить о 6 группах крови в системе АВ0, в практической же работе по переливанию крови по прежнему пользуются делением людей на 4 группы.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0

Группы крови по системе АВ0 определяются капельным методом одним из двух способов:

1. Простой реакцией со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

2. Двойной реакцией (перекрестным способом) со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами.

УСЛОВИЯ И ОСНАЩЕНИЕ, НЕОБХОДИМЫЕ  ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

Определение группы крови производится в светлом и теплом помещении, так как при температуре ниже 17-18°С может наступить холодовая панагглютинация, что может повлечь неправильную трактовку результата реакции и ошибку в определении группы крови.

В практической работе чаще используется метод определения группы крови со стандартными гемагглютинирующими сыворотками. Для этого необходимо иметь:

1.Набор стандартных сывороток I(0), II(А), III(В), IV(АВ) групп двух различных серий для каждой группы. Стандартные сыворотки готовят из крови человека определенной группы. В них определяет наличие не только того или иного агглютинина, но и его титр, который должен быть не ниже 1:32. Для уменьшения опасности ошибок, возможности перепутать сыворотки, они искусственно окрашиваются в определенные цвета: I(0) -бесцветная, II(А) - голубой, III(В) - розовый и IV(АВ) - жёлтый цвета.

Перед определением группы крови необходимо убедиться в пригодности стандартных сывороток. Нельзя пользоваться сыворотками, если ампулы или флакончики оказались разбитыми, с трещинами, не имеет этикеток или данных о титре, номера серии и срока годности, при наличии признаков загрязнения или инфицированноети (мутные, с хлопьями).

2. Глазные пипетки отдельно для каждого флакона сыворотки.

3. Специальную маркированную тарелку.

4. Стеклянные палочки для перемешивания крови и сыворотки.

5. Кровь для определения группы берется из пальца (чаще IV) уколом мягких тканей ногтевой фаланги разовым скарификатором.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ ПРОСТОЙ РЕАКЦИЕЙ

Берут специальную маркированную тарелку для определения группы крови, если её нет, можно использовать простую белую тарелку. Тарелку разделяет на 6 секторов и слева направо АВ0 проставляет цифры I, II, III, обозначавшие стандартные сыворотки (по два сектора для одногруппных сывороток двух различных серий). Каплю стандартной сыворотки I группы наносят пипеткой под цифрой I, в нижнем секторе под этой же цифрой I другой пипеткой наносят каплю сыворотки этой же группы, но другой серии, затем каждый раз новой пипеткой наносят капли сывороток двух серий II и III групп соответственно под цифрами II и III. В центр тарелки или специальное окошко маркированной тарелки помещается капля крови обследуемого. После этого стеклянной палочкой берут маленькую каплю этой крови и смешивает с каплей стандартной сыворотки, так поступают со всеми 6 каплями стандартных сывороток каждый раз используя новую палочку или разные её концы. Капля сыворотки должна быть достаточно большой, а крови в 5-10 раз меньше (1:10). Тарелку берут в руки и осторожно покачивают для лучшего смешивания сыворотки и крови.

По истечению 5 минут оценивают результат реакции, причем результаты исследования одной серии должны полностью совпадать с результатами исследования другой.

Учет результатов определения группы крови АВ0

Агглютинация эритроцитов с реагентами			Кровь принадлежит к группе
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
-	-	-	0 (I)
+	-	+	A (II)
-	+	+	B (III)
+	+	+	AB (IV)

Примечание: Знаком (+) обозначена агглютинация, знаком (-) отсутствие агглютинации.

1. Если все три стандартные сыворотки I, II и III групп дали отрицательную реакцию, т.е. агглютинации не наступило и все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет, это значит, что эритроциты исследуемой крови не имеют агглютиногенов и она принадлежит к группе крови 1(0).

2. Если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А (II), а сыворотки 0(I) и В(III) дали реакцию положительную, т.е. в ней появились зёрна агглютинации, то испытуемая кровь принадлежит к группе А (П).

3. Если сыворотка В (Ш) дала отрицательную реакцию, а сыворотка групп 0(I) и А(II) положительную, то испытуемая кровь принадлежит к группе В(Ш).

4. Если все три сыворотки дали положительную реакцию (наступила агглютинация), то испытуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV)0, т.е. эритроциты этой крови имеют агглютиногены А и В. Для исключения не специфической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой АВ (IV) группы. Если агглютинация при исследовании с этой сывороткой отсутствует, то её можно отнести к АВ (IV) группе.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ