2.4.4. Формалиновая реакция

Природа этой реакции не изучена, но эффективность достигает 90% и более. Привлекает также относительная простота выполнения реакции. Из яремной вены берут 10 мл крови, отстаивают 2 суток, пока сгустившаяся кровь не отделится от сыворотки. 1 мл сыворотки отсасывают с помощью пипетки и переливают в другую чистую пробирку, добавляя в нее 2 капли 40% формалина. Дают постоять 2 суток. Если по истечении этого времени сыворотка стала густой и не выливается при переворачивании пробирки, реакция положительная, если она густа и тягуча, консистенции меда, реакция сомнительная, если консистенция сыворотки изменилась мало, реакция отрицательная.

2.4.5. Метод биопробы

Нередко для уточнения диагноза пользуются методами биологической диагностики, т.е. заражением подопытных животных материалом, взятым от исследуемых больных. Существенное значение в таких случаях играет специфичность возбудителя. Например, Tripanosoma equiperdum, возбудитель случной болезни, в норме приживается только у непарнокопытных. Тем не менее в целях проведения биологической диагностики можно использовать кроликов. Для этого берут соскобы из половых органов больных животных, разбавляют их стерильным физиологическим раствором и с помощью шприца вводят в тестикулы кролика. Если у изучаемого паразитоносителя имеются в половых органах возбудители, они размножаются в организме кролика и могут быть обнаружены микроскопированием мазков из экссудата, взятого из опухолей, образовавшихся в тестикулах кролика.

T.evansi, возбудитель су-ауру, а также многие другие трипанозомиды, паразиты крови теплокровных, обладают более широким диапазоном специфичности. Именно поэтому все лабораторные животные восприимчивы к трипанозомам су-ауру - мыши, морские свинки, крысы, кролики, суслики, а также собаки, кошки, овцы и др. Их заражение производят внутривенно, перитонеально и перкутанно, вводя им кровь исследуемого животного, подозреваемого на паразитоносительство возбудителя су-ауру. У зараженных таким путем животных отмечают развитие всех клинических признаков, характерных для этой болезни, и через 1-2 дня микроскопируют их кровь или перитонеальный экссудат, изготавливая и окрашивая мазки, как это описано выше. При этом надо учитывать, что инкубационный период су-ауру у мышей равен 2-10 дней, у более крупных животных - от 3-5 до 6-20 дней.

Подопытных животных можно использовать для получения специфического антигена, для последующих иммунологических исследований. В частности, это лежит в основе метода А.Ч.Лаверана и Ф.Мениля, которые предложили метод перекрестного заражения возбудителем су-ауру овец и коз, устойчивых к заражению многими патогенными формами трипанозом. Они легко переносят искусственное заражение, приобретая к ним иммунитет.

2.4.6. Методы диагностики при лейшманиозах

И висцеральная, и кожная форма лейшманиозов, будучи трипанозоматидными заболеваниями, обладают рядом особенностей, которые следует учитывать при взятии материала для диагностических целей. Главная особенность - поражение клеток ретикуло-эндотелиальной системы амастиготными формами возбудителей. Это значит, что для исследований необходимо брать пунктаты этих тканей.

При кожной форме внимательно изучают язвы на носу и вокруг глаз у собак и берут материал для исследований из нераспавшихся бугорков в зоне краевого инфильтрата, где скапливаются гистиоциты, моноциты, макрофаги. Из этого материала делают мазки, как обычно, их красят и микроскопируют при масляной иммерсии с объективом 90^х в поисках мелких амастигот в клетках.

При висцеральной форме берут пункции либо из увеличенных лимфатических узлов в паху, либо из костного мозга. В последнем случае работа складывается из выполнения следующих операций:

1. Закрепляют животное на операционном столе в боковом положении.

2. Сбривают шерсть с кожи на месте операционного поля в верхней части большой берцовой кости.

3. Дают собаке наркоз.

4. Операционное поле обрабатывают спиртом и спиртово-йодной смесью.

5. Вдоль кости скальпелем делают надрез длиной 2-3 см.

6. Трепанируют кость стерильным сверлом с помощью дрели.

7. В отверстие вводят толстую иглу с тупым концом и аспирируют костный мозг.

8. Ушивают рану, стерилизуют ее спирто-йодной смесью.

9. Наклеивают повязку.

10. Из взятого пунктата делают мазки и красят их, как отмечено выше, с последующим их микроскопированием для обнаружения амастиготных форм лейшманий.

При условии больших трудностей обнаружения возбудителей в пунктатах лейшмании можно культивировать in vitro на культуральных средах по следующей методике: наиболее употребима среда NNN следующего состава: агар-агар - 14 г, поваренная соль - 6 г, вода дистиллированная - 900 мл. pH среды должна быть 7,4-7,6.

Среда стерильно разливается по бактериальным пробиркам. В нее добавляют дефибрированную кровь кролика, взятую из сердца. Делают посев из пунктата или из раны. Культивируют в термостате при 22С несколько дней. Паразиты размножаются в агар-агаре, точнее - в конденсационной жидкости на 2-4 день. Обычно это - лептомонадные формы, промастиготы.

На скошенном агар-агаре они образуют колонии в виде мелких прозрачных скоплений.

Такие культуры можно хранить, надев на ватные пробки резиновые колпачки. Температура 18-20С.

Промастиготы, полученные в таких культурах, исследуются либо витально, либо на мазках. Убитые промастиготы могут быть использованы как специфический антиген для серологических исследований.