Выполнение работы

Для измерения концентрации витамина В₂ в растворе необходимо знать некоторые условия определения, поэтому сначала исследуют зависимость флуоресценции от рН среды и от концентрации раствора витамина.

1. Исследование влияния среды (рН) на интенсивность флуюресценции раствора рибофлавина

В 7 мерных колб вместимостью 50 мл вносят по 1 мл стандартного раствора витамина В₂ , затем в б колб добавляют по 10 мл буферных смесей с рН 1, 4, 6, 8, 10, 12 и во все доливают дистиллировалную воду до метки.

Включают прибор и настраквают его по соответствующей инструкции. Наливают в кювету раствор из седьмой колбы {нёйтральная среда) и устанавливают стрелку на отметку 60 делений шкалы прибора.

Затем поочередно измеряют иккнсивность люминесценции во всех растворах ввтамина В₂ с различными значениями рН. Данные вносят в табл. 1.

На основании полученных данных строят график зависимости интенсивности люминесценции от рН среды. По графику находят оптимальные значения рН среды для количественного определенкя.витамвва В₂ в растворе.

Таблица 1

Результаты измерения интенсивности флуоресценции стандартныхрастворов рибофлавина при различных рН

рН раствора	1	4	6	8	10	12
Интенсивность флуоресценции, Ј, отн.ед.

2. Исследование зависимости интенсивности люминесценции от концентрации раствора рибофлавина –

Из стандартного раствора витамина В₂ (40 мкг/мл) готовят в мерных колбах вместимостью 50 мл ряд растворов с различной. концентрацией витамина В₂ : 0,8; 4; 10; 20; 40 мкг/мл. Для этого наливают соответственно 1; 5; 12,5; 25; 50 мл раствора витамина В₂ и доводят до метки дистиллированной водой.

Прибор настраиваот по раствору с концентрацией 20 мкг/мл на отметку 80 делений шкалы прибора и измеряют интенсивность люминесценции всех приготовленных растворов. Результаты измерений заносят в табл. 2.

На основании полученных данных строят график зависимости интенсивности люминесценции от концентрации раствора витамина В₂ и делают соответствующий вывод о “пороговой” концентрации раствора, когда сохраняется прямопропорциональная зависимость J = f(C).

Таблица 2.

Результаты исследования зависимости интенсивности люминесценции от концентрации раствора рибофлавина

Объем стандартного раствора В2, мл	1	5	12,5	25	50
Концентрация стандартных растворов растворов В2, мкг/мл	0,8	4	10	20	40
Интенсивность люминесценции, отн.ед.

З. Определение содержания витамина В₂ в растворе неизвестной концентрации В колбу вместимостью 250 мл вносят 2,5 мл стандартного раствора В₂ и доводят до метки дистиллированной водой и получают стандартный раствор витамина В₂ с концентрацией 0,4 мкг/мл.. Из этого раствора готовят в мерных колбах вместимостью 50 мл растворы различной концентрации (табл. З).

Таблица 3

Результаты измерения интенсивности люминесценции стандартных растворов и задачи

Объем стандартного раствора В2 (0,4 мкг/мл), мл	5	10	12,5	25	40	50	Задача
Концентрация стандартных растворов растворов В2, мкг/мл	0,04	0,08*	0,10	0,20	0,32	0,40
Интенсивность люминесценции, отн.ед.

* По этому раствору настроить прибор на отметку 80 делений шкалы.

По результатам измерений строят градуировочный график и по графику определяют содержание витамина В₂ в растворе неизвестной концентрации.

По данным табл. 3 с помощью ЭВМ можно рассчитать параметры регрессии «а» и «в» уравнения регрессии Ј_а = а + вс, по которому определяют концентрацию витамина В₂ в задаче.