Лабораторная диагностика бешенства

Лабораторная диагностика бешенства проводится на основании выявления телец Бабеша-Негри. Внутриклеточные включения при бешенстве (тельца Бабеша - Негри) обнаруживаются в нервных клетках Аммонова рога и в клетках Пуркинье мозжечки. Тельца расположены в цитоплазме рядом с ядром клетки. При окраске по Туревичу или Манну тельца Бабеша-Негриокрашиваются в красный цвет.

Для исследования берут кусочки мозговой ткани в стерильную посуду и хранят в период транспортировки в лабораторию в глицерине на льду.

Специфический антиген в мазках-отпечатках и гистологических срезахмозга и подчелюстных желёз погибших людей и животных определяют в прямой и непрямой РИФ с использованием коммерческого антирабического иммуноглобулина. Для постановки биологической пробы используют белых мышей, заражают их интрацеребрально, и у заражённых животных развиваются параличи с последующей гибелью животных. Животных вскрывают и исследуют мозг на наличие телец Бабеша-Негри и специфического антигена в РИФ.

Для идентификациивозбудителя используют следующие особенности вируса. Возбудитель представлен одним антигенным вариантом. Выделяют "фиксированный" и "уличный" вирус бешенства. Оба вируса антигенно идентичны. Нейтрализующее действие навозбудитель оказывают антитела к поверхностным гликопротеиновым антигенам. Комплементсвязывающие антитела к антигенам нуклеокапсида не оказывают протективного действия. Вирус имеет следующие антигены: NP — нуклеопротеидный (антиген сердцевины), G — поверхностный гликопротеидныйAg, Ml и М2 — два негликозилированных белка, L и NS — протеины транскриптазы. Для идентификации вируса используют комплементсвязывающие антитела к NPAgвируса и вируснейтрализующие антитела к GAg вируса.

Серодиагностика проводится только для определения поствакцинального иммунитета. Антитела к вирусу бешенства выявляют в РН, РСК, РИФ, РИА и ИФА.

Занятие № 22

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Изучить основные группы энтеровирусов.

2. Изучить биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов.

3. Изучить принципы вирусологической диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Научиться подбирать антимикробные препараты для идентификации,

лечения и профилактики заболеваний, вызванных энтеровирусами.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с энтеровирусной инфекцией;

• интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью диагностики энтеровирусных инфекций;

• классифицировать препараты в соответствии с их назначением

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

• о правилах забора материала для исследования;

• о современных вакцинах для профилактики и лечебных препаратах

Дата____________

Работа № 1. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекции

См. теоретическую справку

И сследуемый материал:

____________________

____________________

____________________

Работа №2. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) Цель: учестьрезультат РСК, поставленной с целью идентификации вируса полиомиелита, выделенного от больного с подозрением на полиомиелит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Опыт КС КВ контроль эрит. барана КГС

Результат:_____________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) Определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, УР-2и VP-3). Учесть результат реакции. Сделать вывод.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре тканиприменяется наряду с изучением цитопатического эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

	Диагностические сыворотки, содер­жащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита			Контроль специфи­ческойсы- воротки	Контроль культуры клеток	Контроль вируса
	VP-1(тип1)	VP-2 (тип2)	VP-3 (типЗ)
Результат реакции

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа №3. Серологическая диагностика энтеровирусов

А) Учесть готовый результат РСК с парными сыворотками больного с целью выявления нарастания титра специфических антител против вируса Коксаки тип А.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

титры 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 КА КС КГС

1-ая неделя

2-ая неделя

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) Учесть готовый результат реакции РТГА с парными сыворотками реконвалесцента с целью выявления нарастания титра антигемагглютинирующих антител к вирусу ECHO-11.

Направление:__________________________________________________________________

Ингредиенты:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Титры 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 КЭ К спец.сыв. КД

1-ая неделя

2 -ая неделя

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:________________________________________________________________________

Работа №4. Ситуационная задача

Женщина, 25 лет на 3 неделе беременности поступила в клинику с жалобами на общую слабость, тошноту, отсутствие аппетит, ноющие боли в правом подреберье. Из анамнеза, больная приехала из Туркменистана.

1. Какой вирус гепатита мог вызвать инфекционный процесс у больной?

________________________________________________________________________

2. Перечислить признаки, характерные для данной инфекции.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Составить план лабораторного обследования на гепатит, указать, какие реакции и с какой целью используются для диагностики заболевания.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Описать препараты:

Цель: Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).