Окраска по Граму (классический вариант)
Метод окраски по Граму является самым
универсальным из сложных методов
окраски. Отношение к окраске по Граму
является важным опознавательным
признаком бактерий. Микроорганизмы,
входящие в группу грамположительных,
имеют многослойную клеточную стенку с
большим содержанием пептидогликана и
образуют прочное соединение его и
основных красителей (генцианвиолета и
раствора Люголя), которое не обесцвечивается
при воздействии на них спирта. Вследствие
чего при дополнительном окрашивании
фуксином грамположительные микроорганизмы
не изменяют первоначально принятый
фиолетовый цвет. Грамотрицательные
микроорганизмы, имеющие в клеточной
стенке меньше пептидогликана, образуют
с генцианвиолетом и Люголем не прочный
комплекс, легко разрушающийся под
воздействием спирта, в результате чего
они обесцвечиваются и затем окрашиваются
фуксином, приобретая розовый цвет.
Методика окраски по Граму:
1. На фиксированный мазок кладут
фильтровальную бумагу и наносят каплю
генцианового фиолетового на 1-2 минуты.
2. Снимают фильтровальную бумагу, не
промывая водой, наносят раствор Люголя
до почернения на 1-2 минуты, затем сливают
краситель.
3. Не промывая водой, наносят 96% спирт на
30 секунд-1 минуту.
4. Промывают препарат водой.
5. Докрашивают фуксином Пфейффера в
течение 1- 3 минут.
6. Промывают водой и высушивают между
листами фильтровальной бумаги.
Задание на дом: учебник С.А. Павлович
«Медицинская микробиология»
Мн. 1997 стр. 26-34, повторить стр. 9-23
