Правила микроскопирования:

Работа с микроскопом требует строгого соблюдения правил работы с ним. При микроскопировании в качестве источника света используется естественное освещение и искусственные источники света. При рассматривании неокрашенных препаратов пользуются суженой диафрагмой и опущенным конденсором. Окрашенные препараты микроскопируют при поднятом конденсоре и открытой диафрагме.

1. С помощью зеркала, конденсора и диафрагмы обеспечивают хорошее освещение.

2. Помещают препарат на предметный столик микроскопа и, используя объектив х8, получают четкое изображение

3. После смены объектива х8 на х90 (иммерсионный объектив) и под контролем глаза с боку, осторожно отпускают его до прикосновения с покровным стеклом

4. Глядя в окуляр, медленно с помощью макровинта поднимают тубус микроскопа до получения четкого изображения, после чего с помощью микровинта (пол-оборота в одну сторону или другую) добиваются наилучшего изображения.

РЕКОМЕНДУЕТСЯ во избежание утомления зрения оба глаза держать открытыми.

5. По окончании микроскопирования поднимают тубус и снимают препарат. Мягкой чистой салфеткой вытирают иммерсионный объектив, в случае засыхания масла линзу вытирают спиртом или бензином. Конденсор опускают. Микроскоп покрывают чехлом или хранят в футляре для защиты его от света, пыли, влаги. Необходимо бережно обращаться с объективом и другими оптическими частями. При работе с микроскопом нельзя применять большие усилия, нельзя пальцами касаться линз. РАЗБИРАТЬ И СОБИРАТЬ ОБЪЕКТИВЫ ЗАПРЕЩЕННО!

Изучение морфологии микроорганизмов в окрашенном состоянии является наиболее распространенным в микробиологии методом. Этот метод имеет много достоинств:

- позволяет изучить морфологические особенности микроорганизмов и дает возможность в некоторых случаях точно определить изучаемый микроорганизм.

- удобен в практической работе, так как значительно легче производить исследования, пользуясь убитыми микроорганизмами, чем живыми.

- легко доступен, благодаря технике окрашивания

Приготовление окрашенного препарата включает:

1. приготовление мазка; 2. высушивание мазка; 3. фиксация мазка; 4. окраска

Для того чтобы приготовить мазок из микробных культур с жидкой питательной среды необходимо бактериальной петлей маленькую каплю исследуемой культуры нанести на обезжиренное предметное стекло и круговыми движениями петли распределить равномерным слоем в виде кружка диаметром в 1-2-копеечную монету. Чтобы приготовить мазок из культуры, выращенной на плотной питательной среде, необходимо на середину стекла нанести каплю физ. раствора или дистиллированной воды, после чего внести в неё бактериальную культуру (петлю с небольшим количеством микробной культуры) так, чтобы капля стала слегка мутноватой. После этого излишек микробного материала на петле сжигают в пламени горелки и готовят мазок по описанному выше способу.

Высушивание проводят при комнатной температуре.

Фиксация препарата преследует следующие цели:

- убить микроорганизмы и сделать безопасной работу с ними

- прикрепить мазок к стеклу, чтобы он не смывался при дальнейших манипуляциях

- сделать микроорганизмы более восприимчивыми к окраске, так как убитые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые

Различают физические и химические методы фиксации

Физический способ фиксации: предметное стекло с препаратом мазком к верху плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки.

Химический способ: на высушенный мазок капают (или опускают мазок в стакан)

1. безводный метиловый спирт на 5 минут

2. этиловый спирт, либо жидкость Никифорова, либо жидкость Карнуа на 10-15 минут

3. ацетон на 5 минут

Техника простого метода окраски:

Фиксированный препарат помещают мазком вверх на подставку. На мазок пипеткой наносят раствор красителя (синь Леффлера на 3-5 минут или раствор фуксина на 1-2 минуты) так, чтобы он весь был покрыт красителем.

После окраски краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги. На высушенный мазок капают каплю иммерсионного масла и микроскопируют. Простые методы окраски являются ориентировочными в то время как сложные (дифференциальные) методы позволяют выявить физико-химические особенности микробной клетки. В отличие от простых методов при сложных методах окраски используется для окрашивания нескольких красителей и обесцвечивающие вещества.