Вопрос 33

Теория иммунитета Эрлиха  — одна из первых теорий антителообразования, согласно которой у клеток имеются антигенспецифические рецепторы, высвобождающиеся в качестве антител под действием антигена. П. Эрлих каким-то образом осознал, что и до контакта с конкретным микробом в организ­ме уже есть антитела в виде, который он назвал "боковыми цепями". Как мы теперь знаем, это именно так, и "боковые цепи" Эрлиха — это подробно изученные в наше время рецеп­торы лимфоцитов для антигенов.

  Ерне  выдвинул вариант селективной  теории . По его представлениям, в организме постоянно присутствуют антитела самой разнообразной специфичности. Антитело после взаимодействия с соответствующим антигеном поглощается фагоцитирующими мононуклеарами, что приводит к активной продукции этими клетками антител исходной специфичности.

Особое место в иммунологии занимает клонально-селекционная теория иммунитета М.Бернета. Он использовал представления П.Эрлиха и Н. Ерне  о предсуществовании антител разной специфичности, но указал на то, что каждое специфическое антитело синтезируется отдельным клоном клеток. По М.Бернету, при дифференцировке лимфоцитов от стволовой кроветворной клетки и при параллельном процессе мутационных изменений в генах, контролирующих синтез специфических антител, возникают клоны клеток, которые способны взаимодействовать только с антигеном соответствующей специфичности. В результате такого взаимодействия формируется отобраный по специфичности клон, который либо секретирует антитела заданной специфичности, либо обеспечивает строго специфическую клеточную реакцию.

Вопрос 31

Иммуноферментный анализ

В настоящее время иммуноферментный анализ (ИФА) является наиболее широко

распространенным иммунологическим методом

• антитела или антигены фиксируются на внутренней поверхности

полистироловых планшетов для иммунологических реакций;

• в качестве метки используется фермент

• реакция учитывается визуально, после добавления в лунку

субстрата для данного фермента.

Метод ИФА с использованием индикаторных полосок (иммунохроматография) широко

используется в развитых странах для самотестирования.

Поверхность индикаторной полоски покрыта антителами

против выявляемого антигена. Вместе с антителами на твердой фазе иммобилизованы

молекулы фермента глюкозооксидазы. Готовую полоску погружают в исследуемый образец.

Антитела связывают молекулы антигена из пробы. Степень заполнения вакантных антител

пропорциональна концентрации антигена. Затем индикаторную полоску переносят в раствор,

содержащий конъюгат стандартного антигена с пероксидазой, субстрат для глюкозооксидазы

Регистрацию проводят визуально

Анализируемый материал (сыворотки, слюна, моча) не требует

предварительного разведения и дополнительной обработки.

Иммуноферментный анализ или метод – выявление антигенов с помощью

соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения

антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат-хромоген.

Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность

окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА

применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности

для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов,

По сравнению с ранее описанными методами ИФА обладает существенными

преимуществами:

❖ высокой чувствительностью, позволяющей выявлять до 0,05 нг/мл антигенного

материала;

❖ высокой специфичностью за счёт использования моноклональных антител,

взаимодействующих со строго определёнными эпитопами анализируемых антигенов;

❖ автоматизацией всех этапов проведения исследования.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Определение неизвестных антител включает в себя следующие этапы: 1) связывание

известного антигена с пластиком лунки планшета; 2) внесение испытуемой сыворотки; 3)

внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки); 4) внесение

хромогенного субстрата.

Определение неизвестных антигенов состоит из таких этапов: 1) связывание антител,

специфичных для искомого антигена, с пластиком лунки планшета; 2) внесение

антигенсодержащего материала; 3) внесение 2-х антител той же специфичности; 4) внесение

конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки); 5) внесение хромогенного

субстрата.