Методы культивирования вирусов.

Вирусы не способны культивироваться на питательных средах, т.к. являются внутриклеточными паразитами.

1. Метод культивирования в организме чувствительных экспериментальных лабораторных животных.

Ограничения:

1) не все вирусы человека размножаются в организме лабораторных животных;

2)в организме экспериментальных животных есть иммунная система, которая может оказывать влияние на размножение вирусов.

2. Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах.

Куриные эмбрионы имеют двухслойную экто- и энтодермальную хорион-аллантоисную оболочку; желточный мешок построен из мезодермальных клеток. Т.о., куриный эмбрион содержит ткани любого происхождения.

Куриный эмбрион не обладает иммунологической активностью.

Дешевле по сравнению с лабораторными животными. После заражения куриных эмбрионов они погибают вследствие размножения вирусов. На оболочках эмбриона могут образовыватся бляшки – мелкие зернистые образования. Вирус накапливается в жидкости куриного эмбриона.

Но: в куриных эмбрионах размножаются не все вирусы человека.

3. Метод культивирования вирусов в культуре ткани

– для культивирования вирусов вне организма; используют эмбриональные, опухолевые клетки, которые активно размножаются в питательных средах для культуры тканей.

Типы культур тканей:

1. перевиваемые тканевые культуры – культуры обычно опухолевых клеток. Они стандартные. Их нужно постоянно поддерживать, они одинаковы во всех лабораториях мира;

2. первично-трипсинизированные тканевые культуры

культуры эмбриональных тканей, которые готовятся каждый раз по мере надобности: эмбриональную ткань измельчают, затем подвергают обработке трипсином (чтобы разрушить межклеточные связи), центрифугируют → отдельные клетки. Эти культуры ткани обладают хорошими ростовыми качествами, но они не стандартны.

Для поддерживания культур ткани служат специальные синтетические питательные среды.

Культивирование вирусов под агаровым покрытием (однослойные культуры тканей) дает возможность получить потомство отдельных вирионов.

Методы регистрации размножения вирусов

1. Организм животного

   • Гибель;

   • Выработка антител;

   • Наличие антигена;

   • Изменения в организме животного (болезнь).

2. Куриный эмбрион

   • Гибель;

   • Бляшки на оболочках;

   • Титрование антигена.

3. Культура ткани

при размножении вирусов проявляются изменения, которые не свойственны здоровым клеткам:

• ЦПЭ (цитопатический эффект)

• У культивируемых вирусов есть феномен гемадсорбции (в результате избыточного синтеза гемагглютинин экспрессируется на наружную поверхность клеток культуры ткани и они приобретают способность адсорбировать эритроциты);

• появление в клетках включений – морфологических структур, которые обнаруживаются только в зараженных вирусом клетках культуры ткани.

Виды включений:

1. по локализации

- ядерные

- цитоплазматические

- смешанные.

2. По характеру окраски по Романовскому-Гимза:

– эозинофильные;

– базофильные.

Типы включений характерны для определенного вируса.

• Учет размножения вирусов в культуре ткани (метод цветной пробы – ориентировочный тест, который говорит о нарушении клеточного метаболизма):

- если культура ткани не заражена → в клетках протекают процессы метаболизма → продукты метаболизма обнаруживаются в питательной среде, рН изменяется в кислую сторону, изменяется цвет индикатора;

- если культура ткани заражена вирусом → нарушения клеточного метаболизма → продукты метаболизма не обнаруживаются в питательной среде → рН не меняется → индикатор не меняет цвет.

Культуры тканей по чувствительности к вирусам делятся на 3 группы:

1. пермессивные

(поддерживает вирусную инфекцию);

2. непермессивные

(не способны поддерживать вирусную инфекцию);

3. полупермессивные

(вирус поддерживается, но не размножается; такие клетки передают вирусную инфекцию при контакте с другими клетками).