Бактериофаги
Бактериофаги _______________________________________________________________________________
Лизогения __________________________________________________________________________________
Лизогенная культура _________________________________________________________________________
Лизогенная система __________________________________________________________________________
Профаг _____________________________________________________________________________________
Лизогенная конверсия ________________________________________________________________________
Схема выделения и идентификации бактериофагов:
1-й этап.
Выделение бактериофагов (фильтрация материала через бактериальные фильтры, нагревание до 75°С или обработка хлороформом с целью устранения сопутствующей микрофлоры. Получение фагофильтрата.
2-й этап.
Качественное определение бактериофагов в исследуемом материале (фильтрате) на жидких и плотных питательных средах.
а) Методы индикации бактериофагов на жидких питательных средах.
В две пробирки с жидкой питательной средой засеяли индикаторную культуру бактерий (E. coli). В первую пробирку внесли исследуемый фагофильтрат. Учет результата.
б) Методы определения бактериофагов на плотных питательных средах.
На чашку с МПА засевают газоном кишечную палочку и пипеткой наносят исследуемый фильтрат. Инкубация в термостате.
|
|
E.coli (посев газоном) Результ ___________ __________________Вывод ____________ __________________
|
Метод Фишера Фаг наносится на поверхность засеянных на МПА культур бактерий
Результат _________________________ __________________________________ Вывод:____________________________ __________________________________ |
Используемые культуры бактерий в секторах: 1. Shigella flexneri 2. Shigella sonnei 3. Salmonella Schottmuelleri 4. Escherichia coli 5. Salmonella Typhi 6. Salmonella Paratyphi A |
Метод Фюрта Фаг вносится в расплавленный и остуженный агар, на который штрихом засевают культуры бактерий
Результат _________________________ __________________________________ Вывод:____________________________
|
3-й этап. Титрование бактериофагов.
Титрование ___________________________________________________________________________________
Титр бактериофага _____________________________________________________________________________
а) Титрование в жидкой питательной среде по Аппельману:
Разведения
|
10-1
|
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5
|
10-6 |
10-7 |
10-8 |
10-9 |
10-10 |
КК |
КФ |
Лизис
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(-) результат - рост индикаторного штамма (муть)
(+) результат - фаголизис индикаторного штамма (прозрачность).
Титр бактериофага равен ____________
б) Титрование на плотной питательной среде по Грациа (метод агаровых слоев).
Количество бактериофагов выражают в количестве бляшкообразующих единиц на 1 мл исследуемого материала (БОЕ/мл).
-
1 мл разведения _________
число негативных колоний __________
1 мл разведения _________
число негативных колоний __________
Результат: концентрация бактериофагов в фаголизате ___________ БОЕ/мл