Этапы выделения чистых культур анаэробных бактерий

► 1-й этап:

а) забор материала для исследования;

б) транспортировка, хранение, подготовка к исследованию;

в) приготовление мазков из патологического материала, окраска по Граму и микроскопия;

г) посев патологического материала на жидкие питательные среды для анаэробов. Инкубация в термостате в анаэробных условиях.

► 2-й этап:

а) изучение характера роста на жидких средах, приготовление мазков, окраска по Граму, микроскопия;

б) пересев на плотную пластинчатую питательную среду с целью получения изолированных колоний. Инкубация в термостате в анаэробных условиях.

► 3-й этап:

а) изучение характера роста изолированных колоний на средах (культуральные признаки) с целью отбора подозрительных колоний, приготовление мазков из подозрительных колоний (окраска по Граму);

б) пересев оставшейся части колонии в жидкую питательную среду с целью накопления чистой культуры. Инкубация в термостате в анаэробных условиях.

► 4-й этап:

Идентификация выделенных чистых культур:

а) морфологические и тинкториальные свойства (приготовление мазка, окраска по Граму);

б) культуральные свойства;

в) биохимические свойства;

г) антигенные свойства;

д) определение токсигенности.

Также в ряде случаев проводится определение чувствительности культуры к антибиотикам.

► Заключение: указывается вид выделенного микроорганизма, при необходимости указываются результаты по чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

ЗАНЯТИЕ № 5

ТЕМА: БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОФАГИЯ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Ферменты бактерий, классификация. Способы изучения биохимических свойств микроорганизмов. Практическое использование биохимической активности в идентификации бактерий

2. Определение сахаролитических свойств, состав сред Гисса; определение протеолитических свойств, определение каталазной и оксидазной активности.

3. Принцип работы и особенности применения приборов автоматической идентификации бактериальных культур (гемокультиватор, автоматический анализатор).

4. Особенности культивирования риккетсий и хламидий.

5. Бактериофаги (фаги). История открытия. Морфология, структурные особенности, химический состав и свойства фагов.

6. Вирулентные фаги. Фазы взаимодействия с бактериальной клеткой. Результаты взаимодействия фага и клетки. Умеренные фаги. Профаг. Явление лизогении. Фаговая конверсия.

7. Методы выделения и титрования бактериофагов на плотных и жидких питательных средах.

8. Применение фагов в микробиологии и медицине. Фагодиагностика и фаготипирование.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1►Изучение биохимических свойств микроорганизмов для идентификации чистой культуры бактерий.

Способы изучения биохимических свойств бактерий:

1. "Пестрый ряд" Гисса («пробирочный» классический тест):

Состав:______________________________________________________________________________________

Принцип действия _____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Учет результатов биохимической активности эшерихий и стафилококка

на "пестром ряду" Гисcа:

Субстрат	Лактоза	Глюкоза	Маннит	Мальтоза	Сахароза	Индол	Сероводород
E.coli
S.aureus

2. Система индикаторная бумажная – СИБ.

Принцип действия _____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

3. Планшетные тест-системы – это системы с высушенными или замороженными субстратами и индикаторами в микроемкостях (лунках) в виде специальных планшетов (панель биохимической дифференцировки энтеробактерий – ПБДЭ).

Принцип действия _____________________________ _____________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________ ______________________________________________

Учет результатов биохимической активности бактерий может проводиться визуально (с помощью кодовых карточек) или с помощью автоматических анализаторов (например, ATB-expression).

Принципы работы анализатора:

- колориметрический для биохимической идентификации бактерий и грибов;

- турбидиметрический для определения антибиотикочувствительности.

4. Определение каталазной активности:

Принцип метода _____________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________

Результат ___________________________________________________________________________________

5. Определение оксидазной активности:

Принцип метода _____________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________

Результат ___________________________________________________________________________________

2►Принцип работы и особенности применения гемокультиватора

К оммерческая система для гемокультур Bact/Alert

Гемокультиваторы предназначены для выделения микроорганизмов из крови и других стерильных жидкостей. Принцип их работы основан на автоматизированном выявлении роста микроорганизмов в образцах крови, помещенных во флакон со специальной средой. Индикация микробного роста во флаконах проводится с помощью выявления флюоресценции или колориметрически. Использование автоматических систем позволяет повысить чувствительность метода (100 клеток в 1 мл) и гарантирует отсутствие посторонней контаминации микроорганизмами (флакон не открывают в течение всего мониторинга).

Работой системы управляет компьютер. Во флакон со средой шприцем вносят исследуемый образец крови. Флакон помещают в индивидуальную ячейку инкубационного блока (в одном блоке 60 ячеек), дальнейший процесс происходит в автоматическом режиме.

Флаконы инкубируются на борту аппарата при температуре 37°С, каждые 10-15 минут инкубации проводится автоматическое считывание признаков микробного роста во флаконе (по изменению цвета индикаторного диска на дне флакона). При появлении роста микроорганизмов срабатывает звуковая и световая индикация, флакон извлекают из аппарата для дальнейшей работы – выделения чистой культуры и ее идентификации.