1. Оценка бактерицидной активности кожи по Клемпарской

Принцип метода: На поверхность кожи предплечья наносится культура E.coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков. На основании полученных результатов рассчитывается индекс бактерицидности (ИБ) по формуле:

К_О-К₂₀

ИБ = ------- х 100, где

К_О

где К_О - количество колоний сразу после контаминации кожи;

К₂₀ - количество колоний через 20 минут.

В норме ИБ более 95%

Время, мин	0*	5*	10*	15*	20*
Количество колоний

ИБ = ______________

Вывод: _______________________________________________________________________________________

2. Определение активности комплемента (с) в реакции иммунного гемолиза

Цель постановки______________________________________________________________________________

Ингредиенты реакции:

Исследуемый материал ________________________________________________________________________

Диагностические препараты _____________________________________________________________________

Разведения сыворотки

1/10

1/15

1/20

1/25

1/30

1/35

1/40

1/45

1/50

1/55

КГС

КЭ

Гемолиз +/-

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Определение активности лизоцима

Титр лизоцима - это максимальное разведение исследуемого материала, в котором еще проявляется литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов.

Ингредиенты реакции:

Исследуемый материал ________________________________________________________________________

Тест-объект: Micrococcus lysodeicticus

Разведения слюны	1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	КК	КС
Лизис +/-

Вывод:_______________________________________________________________________________________

4. Оценка фагоцитоза.

►Определение фагоцитарного числа (процент активных фагоцитов)

Принцип метода: в цитратную кровь вносят культуру стафилококка инкубируют в термостате 30 минут. Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе, микроскопируют, подсчитывают 100 лейкоцитов, из них – число фагоцитирующих. Считаем также число фагоцитированных микробов в активных фагоцитах.

Фагоцитарное число (ФЧ) или процент активных фагоцитов - это число фагоцитирующих клеток, деленное на общее число лейкоцитов (в %). В норме – не менее 50%.

Фагоцитарный индекс (ФИ) – это среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом, т. е. число фагоцитированных микробов делят на число активных фагоцитов. В норме - 4-8.

►Оценка завершенности фагоцитоза (ЗФ).

Принцип метода: в цитратную кровь вносят культуру кишечной палочки и делают высев на питательную среду. После 120 минутной инкубации в термостате высев повторяют и инкубируют оба посева в термостате. Через сутки проводят подсчет колоний и рассчитывают процент завершенности фагоцитоза (ЗФ) по формуле:

К_О-К₁₂₀

ЗФ = ------- х 100, где

К_О

где К_О - количество колоний сразу после внесения культуры;

К₁₂₀ - количество колоний через 120 мин. инкубации в термостате.

В норме завершенность фагоцитоза - 50-99%.

Количество колоний в первом высеве __________ Количество колоний во втором высеве _________

ЗФ =

Вывод:_______________________________________________________________________________________

Зарисовать демонстрационный препарат Незавершенный фагоцитоз N.gonorrhoeae Окраска _____________ Увеличение __________

Иммунный фагоцитоз Схема (нарисовать): 1. Опсонины а) антитела б) комплемент 2. Рецепторы к Fc 3. Рецепторы к С 4. Бактерия 5. Макрофаг.

ЗАНЯТИЕ № 11

ТЕМА: В-ЛИМФОЦИТЫ. ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные участки, полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.

1. Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и структура доменов. Антигенсвязывающие участки.

2. Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела

3. Классы и субклассы иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Биологические свойства иммуноглобулинов

4. Механизм взаимодействия антител с антигенами. Валентность, аффинность и авидность антител. Перекрестные реакции. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.

5. Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация токсинов и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии, подавления фагоцитарной реакции.

6. Прямая и непрямая реакция Кумбса.

7. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1. Изучить структурную организацию молекул иммуноглобулинов:

Отметьте на рисунке: 1 – H-цепь 2 – L-цепь 3 - Шарнирный участок 4 – Fab-фрагмент 5 – Fc-фрагмент 6 – Вариабельный домен легкой цепи 7 – Константный домен легкой цепи 8 – Эпитоп антигена 9 – Паратоп антитела (активный центр) 10 - Вариабельный домен тяжелой цепи 11 – Константные домены тяжелой цепи Валентность Ig ________

Отметьте на рисунке: 1 – IgG, 2 – IgM, 3 – IgA, 4 – sIgA, 5 – IgD, 6 – IgE.