1. Cафу им. М.В.Ломоносова

ИЕНИБ

1. Кафедра ботаники и общей экологии

1. Рабочая тетрадь по «Экологии микроорганизмов»

Курс 2

Отделение экология

Группа 1

Ф.И.О.студента

Архангельск

2012

Занятие 1-2 Морфология бактерий. Приготовление препаратов микроорганизмов

Материалы и оборудование: предметные и покровные стекла, предметные стекла с углублением, полоски фильтровальной бумаги, микробиологическая петля, пинцет, спиртовка, ванночка, мостик из двух стеклянных трубок, соединенных резиновыми трубками; водные растворы красителей – фуксина и метиленового синего, вазелин, иммерсионное масло, колба с водой, дезинфицирующий раствор (3% раствор фенола); микроскоп, термостат, сушильный шкаф, холодильник, бактерицидная лампа.

Работа 1. Получение накопительных культур микроорганизмов

Накопительными называются культуры, в которых преобладает одна группа или даже один вид микроорганизмов. Для получения накопительных культур создают условия, обеспечивающие преимущественное развитие микроорганизмов одного вида.

1.1. Получение накопительной культуры сенной палочки (Bacillus subtilis)

1. Сено из разнотравья мелко нарезать, поместить в колбу на 500 мл, залить водой, добавить немного мела и кипятить 15-20 минут.

2. Сенной отвар разлить в стерильные колбы на 100 мл слоем 1,5 – 2 см, закрыть ватными пробками и поместить в термостат при температуре 22 - 25˚С.

Через двое суток на поверхности среды развивается беловатая пленка Bacillus subtilis, которая при старении (на 3-4-е сутки) становится серовато-зеленой.

1.2. Получение культуры картофельной палочки (Bacillus mesentericus)

1. Вымытые клубни картофеля, не очищая, нарезать кружочками.

2. Поверхность натереть мелом и поместить в чашки Петри на двойной слой фильтровальной бумаги, смоченной дистиллированной водой.

3. Поставить чашки Петри с ломтиками картофеля в сушильный шкаф (t = 100˚С) на 10 минут.

4. Перенести чашки Петри с ломтиками картофеля в термостат (t = 27-30˚С) на 3 - 4 суток.

На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка культуры картофельной палочки. Окраска пленки может быть беловато-серой, розоватой, бурой, черной.

Работа 2. Приготовление прижизненных препаратов микроорганизмов. Метод «раздавленной капли»

Цель работы: овладеть методикой приготовления препаратов живых клеток – препарата «раздавленная капля»; приготовить и изучить препарат, используя имеющиеся настои, накопительные и чистые культуры микроорганизмов.

Ход работы:

1. На предметное стекло нанести каплю воды.

2. Культуру картофельной палочки перенести в каплю воды стерильной микробиологической петлей.

Культуру сенной палочки можно взять стерильной пипеткой. Каплю воды при этом можно не наносить.

3. Покровное стекло поставить на ребро у края капли и осторожно опустить на нее. Капля должна быть небольшой, чтобы после «раздавливания жидкость не выступала за края покровного стекла.

4. Изучить препарат при увеличении ВИ-40^х. Обратить внимание на форму, размеры, скопления клеток, их подвижность. Сделать рисунок, подписать препарат.

Результаты и обсуждение:

Работа 3. Приготовление прижизненных препаратов микроорганизмов. Препарат «висячая капля»

Цель работы: овладеть методикой приготовления препарата живых клеток – «висячая капля»; приготовить и изучить препарат, используя имеющийся материал (настои, накопительные и чистые культуры микроорганизмов).

Ход работы:

1. По центру покровного стекла нанести стерильной микробиологической петлей каплю исследуемой жидкости.

2. Уголки покровного стекла смазать вазелином.

3. На покровное стекло поместить предметное стекло с углублением.

4. Перевернуть препарат на 180˚. Капля должна висеть на покровном стекле над углублением предметного.

5. Висячую каплю рассмотреть под микроскопом с объективом ВИ-40^х. Обратить внимание на форму, размеры, подвижность исследуемого микроорганизма. Сделать рисунок, подписать препарат.