Оптическая активность белков
Растворы всех белков способны вращать плоскость поляризованного света, проходящего через них. Это происходит вследствие присутствия остатков оптически активных аминокислот. Знак и величина оптического вращения зависят:
природа атомов и групп, связанных с ассиметрическим атомом углерода.
от взаимного расположения ассиметрических атомов углерода.
Изменения в структуре и конформации белковых молекул может отражаться на величине его удельного вращения.
Удельное оптическое вращение белков всегда отрицательно. Для глобулярных белков удельное оптическое вращение лежит в области -30о - -60о. Ионизация молекулы мало или совсем не влияет на ее удельное вращение. На величину удельного оптического вращения влияют температура, рН раствора, присутствие в растворе различных веществ, вызывающих изменение его конформации, например, мочевины. При более высоких или более низких значениях рН значение удельного вращения становится более отрицательным. При повышении температуры также происходит увеличение отрицательного удельного вращения. Если возрастание отрицательного вращения не сопровождается разрывом пептидных связей, оно всегда свидетельствует об изменении конформации белка, в основе которого лежат изменения в его вторичной и третичной структуры.
На этом свойстве основаны 2 метода исследования молекулы белка - метод дисперсии оптического вращения и метод кругового дихроизма.
Белки регуляторы Белки-катализаторы Защитные белки
(гормоны, цитокины – (ферменты) иммуноглобулины
инсулин,
интерфероны, трипсин, пепсин,
и
нтерлейкины
РНК-аза, ДНК-аза
Б
елки-рецепторы
Двигательные белки
Р
одопсин
актин, миозин
БЕЛКИ
Структурные
белки
Коллагены,
эластин,
Транспортные белки кератины, фиброин
Гемоглобин,
Цитохромы Запасные белки
Мембранная АТФ-аза казеин, зеин, глиадин
овальбумин
Антибиотики Токсины
Актиноксантин ботулинистический
Колацин столбняка
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
Электрофорез является единственным надежным способом обнаружения парапротеинов в биологических жидкостях, а также является первичной процедурой отбора. Это информативный клинический метод для обнаружения изменений сывороточных белков, связанных с определенными заболеваниями. Изменения по сравнению с нормальной структурой белка сыворотки, ( наличие дополнительных компонентов (моноклональные полос), увеличение / уменьшение нормального содержания компонентов, предупреждает врача о необходимости проведения дополнительного анализа белков.
Методом электрофореза возможно определить различные виды белка в сыворотке крови. Отдельные белки, за исключением альбумина, обычно не определяются методом электрофореза. Однако, измеряются белковые фракции или группы (Альбумин, alfa1-alfa2-бетта-гамма-глобулин). Уровни белковых фракций можно определить путем измерения общего белка сыворотки крови и умножить на относительный процент от каждой доли белкового компонента, или автоматически с применением аппарата HellabioScan.
Электрофоре сыворотки всегда должен сопровождаться измерением сывороточных IgG, IgA и IgM концентраций. Образцы с повышенным содержанием IgA и IgM , которые не могут быть интерпретированы, как поликлональные согласно шаблону электрофореза, должны быть проанализированы дополнительно, чтобы исключить иммунофиксацию небольшими группами парапротеинов и закрытие одной из нормальной зон.
Электрофорез белков помогает выявить заболевания печени и почек, иммунной системы, некоторые злокачественные новообразования (лейкозы), острые и хронические инфекции, генетические поломки и др. Известен ряд своеобразных электрофоретических "синдромов" – типичных картин электрофореграмм, характерных для некоторых патологических состояний.