Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (поликлональная стимуляция) или антигеном (моно- и олигоклональная стимуляция). В последнем слу­чае применяются распространенные антигены или аллоантигены. Митогены стимулируют пролиферацию значительной части Т-лим­фоцитов, поэтому результат оценивают обычно через 3 суток. Антиген стимулирует пролиферацию только тех Т-лимфоцитов, которые несут рецептор к нему, поэтому индуцированную антигеном пролиферацию оценивают через 5—7 суток. Для оценки пролиферативной активности Т-лимфоцитов при­меняют набор широко распространенных антигенов.

В асептических условиях из вены берется 5 – 10 мл крови в пробирку, содержащую 100 – 200 ЕД гепарина. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и оставляют на 60 мин. в термостате при t 37°С для осаждения эритроцитов, которое м.б. ускорено добавлением декстрана, желатина и др. После инкубации в термостате надосадочный слой плазмы, обогащен­ный лейкоцитами, отсасывают в отдельную стерильную про­бирку. Определяют число лейкоцитов в 1 мл. Затем взвесь лейкоцитов разводят питательной средой 199 (содержащей 200 ЕД пенициллина и 100 ЕД стрептомицина в 1 мл) таким образом, чтобы в 1 mi содержалось 1 000000 - 2 000000 лейкоцитов, 20% аутологичной плазмы и 80% культуральной среды.

Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стериль­ные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного антигена и пропускают газовую смесь, содержащую 5% углекислого газа. Флаконы закрывают пробками и помещают в термостат при t 37°С на 5 – 7 дней. За это время культура лейкоцитов периферической крови освобож­дается от сегментоядерных лейкоцитов, исключая эозинофилы, и содержит преимущественно одноядерные клетки, которые идентифицируются как малые, средние и большие лимфоциты, бласты, ретикулярные клетки и макрофаги.

Интенсивность РБТЛ оценивается различными методами.

Морфологический метод заключается в подсчете в окрашен­ном мазке активированных кпеток-бластов на 1000 клеток и определении их процентного содержания. Реакция расценивается как положительная, если число активированных клеток составляет не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число активированных клеток при действии специфического антигена может достигать 35%.

Изотопный метод позволяет определить общую активность культур лимфоцитов путем подсчета включенного в клетки, синтезирующие ДНК, меченного ³Н -тимидина, добавляемого в культуральную среду. Результаты обычно вы­ражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции — отношение радиоактивности стимулиро­ванных и нестимулированных лимфоцитов.

Достоверность РБТЛ проверяется контрольными исследова­ниями с культурой исследуемых лимфоцитов без добавления антигена (для выявления спонтанной бласттрансформации) и с культурой лимфоцитов здоровых доноров, инкубируемой с соответствующим антигеном.

Функциональное состояние системы фагоцитирующих клеток. Фагоцитарная активность нейтрофилов

Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности. Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонирующих факторов сыворотки (антител, комплемента), так и дефектов самих клеток (нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера). Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов (например, стафилококки штамма 209, убитые бактериями, аутофлора больного и др.).