УО "МИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ"
«Микробиология Методическая разработка практического занятия для учащихся отделения «Медико-диагностическое дело» по дисциплине
с микробиологическими исследованиями».
Практическая работа № 69
Тема занятия: «Микробиологическая диагностика
гнойно-воспалительных заболеваний кожи, подкожной клетчатки и других тканей»
Составила преподаватель Якимова Л.М.
Минск 2009г.
Практическая работа № 69
Тема занятия: «Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний кожи, подкожной клетчатки, ушей, глаз и других тканей»
Цель занятия: отработать методику микробиологической диагностики гнойно-
воспалительных заболеваний кожи, подкожной клетчатки, ушей, глаз и других тканей.
Самостоятельная работа:
Знакомство с правилами забора, хранения и транспортировки исследуемого материала при ГВЗ кожи, подкожной клетчатки, глаз, ушей и других тканей.
Посев исследуемого материала на кровяной агар, среду Эндо (среду Мак-Конки), ЖСА, 0,1% полужидкий сывороточный агар или тиогликолевую среду, среду Сабуро.
Приготовление мазков из выросших колоний, окраска по Граму, микроскопия
Идентификация выделенных культур.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам методом диффузии в агар с применением дисков.
Методические указания к практической работе:
Гнойными (гнойно-воспалительными) называются инфекции, сопровождающиеся развитием гнойного или серозно-гнойного воспаления (нагноения). Гнойные инфекций могут быть местными (локальными), системными и генерализованными. Локальные и системные инфекции в свою очередь делят на несколько групп по их локализации, происхождению, этиологии. Среди местных инфекций выделяют нагноения травматических, операционных и ожоговых ран, заболевания кожи и подкожной клетчатки (пиодермия, фурункул, карбункул, абсцесс, флегмона, панариций и др.), гнойные воспаления полостей (эмпиемы), гнойные инфекции (отит, гайморит, аппендицит, пиелит, холецистит, менингит, остеомиелит, ангина и др.) и абсцессы внутренних органов (легких, печени, мозга, перитонзилярной ткани и др.). По длительности течения гнойные инфекции разделяют на острые и хронические, по связи с внешней средой – на открытые и закрытые.
Этиология
Возбудителями гнойных инфекций в основном являются условно-патогенные бактерии, принадлежащие к S. aureus et epidermidis, S. pyogenes et faecalis, E. coli, Proteus sp, K. pheumoniae, Enterobacter sp, P. aeruginosa, Bacteroides sp и другие аспорогоненные анаэробы.
Популяции возбудителей гнойных инфекций, особенно открытых, выраженно гетерогенны. Открытые процессы часто обусловлены ассоциацией микробов. Кроме возбудителей в гнойном очаге могут присутствовать микроорганизмы - контаминанты, не имеющие этиологического и патогенетического значения. В случаях больничного заражения гнойные инфекции часто вызываются госпитальными эковарами бактерий.
Развитию гнойных инфекций способствуют снижение естественного иммунитета и подавление способности к иммунному ответу, вызванные различными факторами, а также нарушения в санитарно-эпидемическом режиме в больничных учреждениях.
Микробиологическая диагностика.
Гнойные инфекции подлежат обязательному микробиологическому исследованию с целью установления этиологического диагноза, чувствительности возбудителя (возбудителей) к антибиотикам, а также источников и факторов передачи инфекций. Основное значение в диагностике имеет бактериологический метод. Для предварительного диагноза используется реакция иммуннофлюоресценции. Вспомогательные данные могут быть получены при микроскопическом исследовании материала. В неясных случаях, особенно при хроническом течении болезни, определенную ценность представляет определение нарастания титра антител к аутокультуре.
Забор материала для исследования
Взятие материала производится во время операции или перевязки. При наличии абсцессов и ран (фистул, гангрены, некроза тканей) кожу вокруг раневой поверхности обрабатывают антисептиком, некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной сухой салфеткой и отбирают отделяемое из основания очага поражения, используя стерильный контейнер или шприц объемом не менее 1 мл.
При отборе проб с помощью микробиологического тампона, используют два тампона (один используют для посева, второй – для бактериоскопии). Материал отбирают из глубины пораженного участка на границе со здоровыми тканями и помещают в стерильную пробирку или в транспортную среду. После обработки поверхности раны и высыхания антисептика с помощью шприца получают аспират из глубины раны; если имеется везикула- жидкость и клетки у основания дефекта.
Материал из закрытого абсцесса отбирают с помощью шприца с иглой.
Микробиологическому исследованию при ожогах, язвах, эрозиях, целлюлитах подлежит биопсийный материал. Объем ткани диаметром 3-4 мм – минимальное количество для культурального исследования.
Гнойное содержимое из раны после укусов получают шприцем после надреза, дренирования или поверхностной обработки инфицированной раны. При свежих укусах бактериологическое исследование проводят не ранее чем через 12 часов, так как в этот период трудно выделить этиологически значимый микроорганизм.
Материал, полученный при оперативном вмешательстве (кости, биоптаты мягких тканей) помещают в стерильный контейнер с физиологическим раствором.
При наличии в ране дренажей для активной аспирации берут стерильным шприцем 1-2 мл отделяемого и помещают в стерильную пробирку.
Материал, отобранный с помощью микробиологического тампона или собранный в стерильный контейнер, хранится при комнатной температуре не более 2-х часов. Возможно хранение и транспортировка материала в транспортной среде до 24 часов при комнатной температуре.
Отделяемое из глаз. Накануне, за 5-8 часов отменяют все лекарственные препараты и процедуры. Материал забирают с пораженных мест в разгар воспалительного процесса с соблюдением правил асептики. Сразу после взятия материал помещается в соответствующую транспортную среду или доставляется в лабораторию не позднее 2-х часов от момента взятия, избегая охлаждения. Допускается хранение материала в транспортной среде при комнатной температуре в течение 24-х часов.
При заборе отделяемого из конъюнктивы отводят нижнее веко и стерильным тампоном или платиновой петлей проводят по поверхности конъюнктивы нижнего века по направлению к внутреннему углу глаза. Исследование из каждого глаза проводят отдельным тампоном. При поражении одного глаза следует производить забор материала параллельно и из здорового глаза в качестве контроля.
При поражении края век берут материл из язвочки у основания ресниц, при этом корочки гноя предварительно удаляют пинцетом.
Материал на исследование из роговицы можно взять платиновой петлей или другим подходящим инструментом, после обезболивания. Если пациент применяет контактные линзы, необходимо исследовать их внутреннюю поверхность.
Отделяемое ушей. При поражениях среднего и внутреннего уха исследуют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств.
При самопроизвольной перфорации барабанной перепонки экссудат собирают стерильным тампоном, используя слуховое зеркало, в этом случае высока вероятность контаминации биологического материала эндогенной флорой. При воспалении наружного уха отбор материала производится во время операции или перевязки. Промыванием раневой поверхности физиологическим раствором удаляют местно применяемые антисептические и антибактериальные препараты. Кожу вокруг раневой поверхности обрабатывают антисептиком, некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной сухой салфеткой и отбирают отделяемое из основания очага поражения.
Микроскопическое исследование. Гной, отделяемое ран, глаз, ушей взятые с помощью одного из тампонов, используют для приготовления мазка по Граму. При микроскопии мазка оценивают количество микробных клеток и характеризуют их морфологические и тинкториальные свойства. Микроскопия мазков из ран, глаз, ушей позволяет быстро получить представление о наиболее вероятной этиологии процесса, а также осуществить выбор оптимальных питательных сред для дальнейшего бактериологического исследования.
Результаты микроскопии имеют ориентировочное значение, так как чувствительность этого метода низка – около 100 тыс. бактерий/мл материала
Бактериологическое исследование. Гной, отделяемое ран, глаз, ушей взятые другим ватным тампоном, используется для посева на кровяной агар, шоколадный агар, среда Эндо (среда Мак-Конки), ЖСА, 0,1% полужидкий сывороточный агар или ТСБ или тиогликолевую среду, при подозрении на анаэробную инфекцию - анаэробный агар. Отделяемое ушей и глаз дополнительно засевают еще на следу Сабуро, при подозрении на грибы. Посев на чашку проводится методом “тампон-петля”.
Культивирование: на кровяном агаре при 35-370 С, 5-10% СО2, в течение 24-48 часов; на шоколадном агаре при 35-370 С, 5-10% СО2, в течение 24-48 часов; среда Эндо агар (среда Мак-Конки ) – при 35-370 С в аэробных условиях, в течение 24 часов; ЖСА - при 35-370 С в аэробных условиях, в течение 24-48 часов; на 0,1% полужидком сывороточном агаре или ТСБ, тиогликолевом бульоне - при 35-370 С в аэробных условиях в течение 48 часов; на анаэробном агаре - при 35-370 С в анаэробных условиях в течение 7 дней, на среде Сабуро при температуре 25-300 С в аэробных условиях в течении 72 часов. Чашки с биологическим материалом просматривают ежедневно. При наличии роста в жидких средах, производят высев на кровяной агар.
Схема посева материала из стерильного контейнера или шприца (полуколичественный метод).
I II III IV
