Сорбенты для гидрофобной хроматографии

При проведении гидрофобной технологии следует учитывая физико-химические параметры сорбентов: пористость, удельную поверхность, гидрофильные и гидрофобные свойства, химическуюстабильность, инертность, проницаемость. Всем этим требования отвечают обратнофазные гидрофобные сорбенты и макропористы гетерогенные полимерные сорбенты типа солоза К 30/40, К 20/40 К 10/40, КГ 8/40, гидрофобные свойства которых выражены более слабо, чем у обратнофазных сорбентов.

Поверхность кремнеземных сорбентов содержит большое числа силанольных (SiOH) и силоксановых групп (Si-0-Si), а также небольшое количество примесей оксидов металлов (табл. ) Наибольшей химической однородностью обладают аэросилогель (силохромы), получаемые спеканием частиц непористого высокой дисперсного диоксида кремния — аэросила.

Таблица  Некоторые типы кремнеземных сорбентов для ОФХ биологически активных веществ

Наименование	Размер пор, нм	Удельная поверх- ность, м2/г	Объем пор, М8/Г	Форма	Состав
Макропорис- тые стекла	20—400	1—100	0,4—2,3	Гранулы сфери- ческой и непра- вильной формы, слоистые гранулы	90% Si02 40% Е203
Макропо- ристые силикагели	4-100	5—350	0,4—1,2	То же	99,7% Si02, 0,3% примеси металлов Fe, Al, Ti и др.
Аэроеилогели (силохромы) Макропорис- тая керамика	8-70 500-1500	100-30 0,4—1,6	0,8—2,0	— « — гранулы неправильной формы	99% Si02, А120з, К203,  Na20
Поверхност- но-слоистые кремнеземы	5—100	20—1	0,1	Гранулы с по- ристым поверх- ностным слоем	—

различные модификации методов ОФХ широко используют для очистки пептидов, таких, как окситоцин, липрессин, АКРГ jJ его производных, пептидного гормона роста —  соматотропина, пептидных антибиотиков, лейкоцитарного интерферона, для разделения высокомолекулярных белков (химотрипсиногена, ферритина и др.).

Использование гидрофобной хроматографии удобно и при работе с высококонцентрированными растворами. Так, раствораммония сульфата в концентрациях, несколько ниже необходимых для высаливания белка, способствует связыванию белков с гидрофобными гелями. Высокая концентрация соли снижает растворимость белков и увеличивает их способность взаимодействовать с неполярной поверхностью сорбента. Фракционирование связанных белков часто достигается понижением полярности элюента (например, с помощью полиэтиленгликоля).

При использовании ион-парных агентов достигается дополнительное усиление селективности обратнофазных адсорбентов при разделении белков, олигопептидов и других БАВ.

Ниже приведен список катионных и анионных амфильных соединений, используемых в качества ион-парных агентов:

Катионяые r₄n⁺

Анионные r₃nh⁺

Алкилсульфонат S₂nh₂⁺ Толуолеульфонат Нафтилинсульфонат   r — органические радикалы С,—С₁₀ Бутилфосфат, Цитрат, Трифторацетат

При подборе условий разделения смеси белков при ОФХ обязательно учитывают рН раствора, вязкость и температуру.