0. Условные обозначения

TFA – трифторуксусная кислота;

ММС – мультимолекулярный слой;

МС – монослой;

ПЛБ – пленка Лэнгмюра-Блоджетт;

DTT – дитиотриэтол;

MALDI – Matrix-assisted laser desorbtion/ionization, ионизация лазерной десорбцией в присутствии матрицы;

MeCN – ацетонитрил;

ОВ – отравляющее вещество;

ТФУ (TFA) – трифторуксусная кислота;

GD – зоман;

HSA – сывороточный альбумин человека;

TOF – Time of flight (Времяпролетный анализатор);

ЖХ (LC) – жидкостная хроматография;

МС (MS) анализ – масс-спектрометрический анализ;

МС-МС (MS-MS) – 2-х ступенчатый тандемный масс-спектрометрический анализ;

ФОС – фосфорорганические соединения;

DHB – 2,5-дигидробензойная кислота;

CHCA – α-циано-4-гидроксикоричная кислота;

ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография;

РММС Fe(III) – сорбент на основе регулярных мультимолекулярных структур, содержащий ионы железа (III);

S_уд, - величина удельной поверхности м²/г;

МАХ – металл-аффинная хроматография;

NET₃ – триэтиламин.

0. Введение

В последние десятилетия интенсивно развиваются высокоразрешающие и высокоспецифичные аналитические методы. Это связано с тем, что с появлением таких методов, как высокоэффективная жидкостная хроматография, капиллярный электрофорез, масс-спектрометрия с мягкими методами ионизации стал возможным анализ многокомпонентных смесей, содержащих белковые соединения.

В биологическом образце может содержаться тысячи и десятки тысяч компонентов, причем в разном диапазоне концентраций, в то время как исследователю необходимо выделить и идентифицировать определенный компонент, отвечающий поставленной им задаче. Спектр задач, решаемый с привлечением перечисленных аналитических методов достаточно широк. Так, например, особый интерес представляет поиск модифицированных белков, так как именно наличие или отсутствие определенных модификаций отражает отклик организма как на внешние воздействие (интоксикация) так и на внутренние изменения (болезнь). К таким модификациям можно отнести фосфорилирование белков. В связи с тем, что наличие такой модификации у определенных белков и пептидов является маркером на ряд онкологических заболеваний, и нарушение процесса фосфорилирования может приводить к таким последствиям как диабет, исследования по их выявлению идентификации имеют огромное значение.

Наиболее подходящим методом для анализа модифицированных белков и пептидов является масс-спектрометрия с мягкими методами ионизации, и в особенности, MALDI масс-спектрометрия [1]. Данный метод позволяет проводить успешный качественный анализ образца, содержащего пико- и аттомоли аналита. Однако анализ может быть осложнен тем, что, во-первых, обычно количество сигналов модифицированных пептидов в спектре меньше, чем немодифицированных, и, во-вторых, интенсивность сигналов модифицированных пептидов значительно ниже. Поэтому при пробоподготовке, предшествующей масс-спектрометрическому анализу необходимо обогащать образцы фосфорилированными пептидами.

Металл-аффинная хроматография с применением сорбентов, содержащих ионы трехвалентных металлов – высокоспецифичный метод пробоподготовки, позволяющей обогащать образцы фосфорилированными пептидами [2]. Однако существующие коммерческие сорбенты обладают высокой стоимостью, производятся зарубежом и адаптированы исключительно к анализу фосфорилированных пептидов. В то время как не меньший интерес представляет модифицирование белков остатками фосфорорганических соединений (параоксон, зарин, RVX или зоман), что является откликом организма на интоксикацию. И на сегодняшний день опубликована только одна работа, посвященная выделению пептида, модифицированного остатком ФОС с помощью металл-аффинной хроматографии с использованием сорбента, содержащим ионы Fe (III) [3].

Таким образом, перспективным направлением представляется разработка сорбентов, в которых поверхность состояла преимущественно из ионов металлов, надежно связанных с поверхностью твердого тела и способных вступать во взаимодействие с анализируемым веществом, и именно такой твердой фазой являются пленки Лэнгмюра-Блоджетт, или системы, полученные путем диспергирования монослоев стеариновой кислоты, снятых с поверхности водной субфазы, содержащей ионы трехвалентных металлов.