Физхим методы, лабораторная 2
.docx
Тема работы: Флуоресцентный метод анализа
Цель работы: Освоить флуоресцентный метод анализа и определить концентрацию пигментов в неизвестном растворе
Ход работы:
-
Подготовили кювету с 2 мл. спирта. Измерили показатели флуоресценции и погрешность измерений на синем светофильтре.
-
Провели серию измерений флуоресценции раствора спирта с вытяжкой пигментов, добавляя при каждом новом измерении 10 микролитров вытяжки.
-
Данные занесли в таблицу:
Таблица 1: Данные флуоресценции вытяжки, погрешности и эталона.
|
E (мкл) |
C (мкг/л) |
Чувств. |
F эталон. |
Погрешн. |
F (сиг) |
F (ед.) |
|
2 |
0 |
10 |
0.115 |
0 |
0.016 |
0 |
|
2.010 |
0.036 |
10 |
0.128 |
0 |
0.106 |
0.689 |
|
2.020 |
0.072 |
10 |
0.118 |
0 |
0.195 |
1.514 |
|
2.030 |
0.107 |
10 |
0.122 |
0 |
0.274 |
2.148 |
|
2.040 |
0.143 |
10 |
0.118 |
0 |
0.37 |
2.996 |
|
2.050 |
0.177 |
10 |
0.114 |
0 |
0.5 |
3.333 |
|
2.060 |
0.212 |
10 |
0.107 |
0 |
0.537 |
4.88 |
|
2.070 |
0.246 |
10 |
0.105 |
0 |
0.62 |
5.813 |
|
2.080 |
0.28 |
10 |
0.107 |
0 |
0.711 |
6.506 |
|
2.090 |
0.313 |
10 |
0.107 |
0 |
0.777 |
7.123 |
|
2.1 |
0.346 |
10 |
0.1 |
0 |
0.85 |
8.361 |
-
При помощи формулы рассчитали флуорисценцию вытяжки в каждом испытании.
F= ((F(c) – F(погр))/ F(эт) – F(погр) ) / ((F(сп.) – F(погр)) /(F(эт)-F(погр))
Полученные данные флуоресценции занесли в таблицу выше.
-
Построили график зависимости концентрации C (мкг/л) от флюоресценции образца F(ед.)
Рис.1. График зависимости концентрации от показателя флюоресценции
-
Определили показатель F для вытяжки коры древесины с неизвестной концентрацией пигментов.
F (древесины) = 3.034
-
При помощи графика зависимости концентрации от флуоресценции, определили значение концентрации пигментов в вытяжке коры древесины.
C (древ.) = 0.147 мкг/л.
Теоретический показатель = 0.14481мкг/л.
-
2 пробирки с хлореллой (1) и с ностоком (2) измерили на всех доступных светофильтрах и рассчитали соотношение:
= F светофильтра / F эталона
-
Полученные данные занесли в таблицу
Таблица 2: Измерение Noctoc
|
Светофильтр |
F (погр) |
F (образца) |
F (ед.) |
|
Синий |
0 |
0,019 |
2,714 |
|
Сине-зелёный |
0 |
0,020 |
3,333 |
|
Зелёный |
0 |
0,205 |
4,1 |
Таблица 3: Измерения Chlorella
|
Светофильтр |
F (погр) |
F (образца) |
F (ед.) |
|
Синий |
0 |
0,019 |
2,714 |
|
Сине-зеленый |
0 |
0,006 |
0,3 |
|
Зелёный |
0 |
0,012 |
0,0585 |
-
Полученные данные по соотношению пигментов водорослей представили в виде гистограмм:
Рис.2. Соотношение пигментов водорослей
1 – синий светофильтр, 2 – сине-зелёный, 3 - зелёный
Вывод: Анализирую данные по определению флуоресценции в водорослях хлореллы и ностока можно придти к выводу, что соотношение пигментов, флюоресцирующих на синем светофильтре выше у хлореллы. Это обусловлено высоким содержданием хлорофилла A, в этом роде водорослей. У ностока наибольшее соотношение флюоресценции наблюдается на зеленом светофильтре, т.к у водорослей данного рода в состав пигментов входят фикобилины, которые активно флюоресцируют в зелёной области спектра.