Проведение анализа.

1. Определение содержания общего билирубина:

Поместить в пробирку	Опытная проба, мл	Контроль на реактивы для опытной пробы, мл	Калибратор, мл	Контроль на реактивы для калибратора, мл
Диазореагент	0,55	-	0,55	-
Кофеиновый реагент	1,25	1,3	1,25	1,3
Сыворотка крови	0,2	0,2	-	-
Сульфаниловая кислота	-	0,5	-	0,5
Калибратор	-	-	0,2	0,2

Содержимое пробирок тщательно перемешать. Время инкубации – 20 минут при температуре 18-25C, длина волны 540 нм, кювета – 10 мм. Измерить оптическую плотность пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против соответствующих контролей на реактивы.

1. Определение содержания связанного билирубина:

Поместить в пробирку	Опытная проба, мл	Контроль на реактивы для опытной пробы, мл	Калибратор, мл	Контроль на реактивы для калибратора, мл
Диазореагент	0,55	-	0,55	-
Физиологический раствор	1,25	1,3	-	-
Сыворотка крови	0,2	0,2	-	-
Сульфаниловая кислота	-	0,5	-	0,5
Кофеиновый реагент	-	-	1,25	1,3
Калибратор	-	-	0,2	0,2

Содержимое пробирок тщательно перемешать. Время инкубации – 5 минут при температуре 18-25C, длина волны 540 нм, кювета – 10 мм. Измерить оптическую плотность пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против соответствующих контролей на реактивы.

Расчёт:

, мкмоль/л

Для определения уровня несвязанного (свободного) билирубина из цифры общего билирубина вычитают показатель связанного (прямого) билирубина.

Референтные пределы: общий билирубин – 5-21 мкмоль/л;

связанный билирубин – менее 3,4 мкмоль/л;

несвязанный билирубин – менее 19 мкмоль/л.

4. Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1. Выполнение лабораторной работы.

4.2. Учёт результатов.

5. Контроль конечного уровня знаний, умений.

1. Оформление работы. Начальная интерпретация результата.

2. КДЗ исследования.

Определение общего билирубина и его фракций имеет большое клиническое значение. Отмечено, что желтуха появляется тогда, когда уровень билирубина в крови превышает 1,6-2,0 мг-%.

При гепатитах, циррозах в крови отмечается резкое увеличение содержания связанного билирубина (часто в основном за счёт моноглюкуронидбилирубина, что является неблагоприятным признаком), происходит от разрушения печёночных клеток. Некоторое возрастание количества свободного билирубина наступает вследствие нарушения функции печени (уменьшение активности ферментных систем, участвующих в глюкуронидировании).

Значительное увеличение содержания связанного билирубина сыворотки при механических желтухах обусловлено переполнением желчных путей вследствие закупорки, их разрыва и последующего перехода желчи в русло крови.

Резкое возрастание количества свободного билирубина при гемолитической желтухе происходит за счёт гемолиза, приводящего к усиленному образованию билирубина.

Гипербилирубинемия свойственна таким заболеваниям как вирусный и сывороточный гепатиты, рак поджелудочной железы, цирроз печени и др.

Общий билирубин возрастает при повреждении печёночных клеток, при гемолитических болезнях, физиологической желтухе новорожденных, при синдроме Криглера-Найяра (дефект УДФ-глюкуронидтрансферазы; больные отстают в физическом и психическом развитии, периодически меняются показатели функциональных проб печени. Гипербилирубинемия превышает 20мг-%), при болезни Жильбера (нарушается транспорт билирубина из крови в гепатоцит по градиенту концентрации; предположительная причина – генетический дефект белков соответствующей транспортной системы; заболевание обнаруживают чаще в юношеском и молодом возрасте, нередко в связи с инфекционным гепатитом или другими острыми инфекционными заболеваниями. Проявляется желтухой, слабостью, диспепсическими явлениями, возможны боли в животе, небольшое увеличение размеров печени), при гипотиреозе, нарушении толерантности к фруктозе.

5.3. Фронтальный опрос.

1. Назовите метод определения билирубина в сыворотке крови.

2. В чём заключается принцип метода?

3. Как рассчитать содержание общего и связанного билирубина?

4. Как рассчитать содержание свободного билирубина?

5. Почему при внутрисосудистом гемолизе эритроцитов у больного наблюдается высокое содержание свободного билирубина в крови, моча оранжево-коричневого цвета, кал – тёмно-коричневый.

6. Какое диагностическое значение имеет определение билирубина?

7. Какая фракция билирубина изменяется при гепатитах, циррозах?

8. При каких заболеваниях повышается общий билирубин?

5.4. Решение ситуационных задач.

Задача 1. У больного выявлена полная непроходимость желчных путей вследствие закупорки их желчными камнями. Какие изменения в содержании пигментов при анализе крови, мочи и кала подтвердят диагноз?

Задача 2. Почему при внутрисосудистом гемолизе эритроцитов у больного наблюдается высокое содержание свободного билирубина в крови, моча оранжевого цвета с оттенком коричневого, кал – тёмно-коричневый.

Задача 3. При проведении обследования больного выявлено: в сыворотке крови содержание общего билирубина – 40,2 мкмоль/л, связанного билирубина – 18,6 мкмоль/л, активность АлАТ – 36,4 мкмоль/л пировиноградной кислоты (в норме – 0,1-0,68 мкмоль/л). Кал имеет нормальную окраску. Для какого заболевания характерны такие результаты лабораторных исследований?