Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом дисков

В настоящее время вместо классического используют тест Кирби-Бауэра. Диски из фильтрованной бумаги, пропитанные препаратами в известной концентрации, наносят на поверхность плотной питательной среды (2% агар, на переваре Хоттингера с 0,11-0,13% аминного азота; чаще - среда АГВ), предварительно засеянной исследуемой культурой.

Инкубируют при +37⁰С в течение времени, необходимого для роста испытуемого микроба (обычно 18 -24часа). Измеряют диаметры подавления роста культур вокруг каждого диска, включая диаметр самого диска. Сравнивают со шкалой активности каждого препарата и дают заключение о высокой чувствительности, умеренной чувствительности и устойчивости микроорганизмов к тому или иному антимикробному агенту. Штаммы, зависимые от антибиотика, растут к диску вплотную, иногда особенно густо и забираясь на него.

1. Составить список и схематически зарисовать прочие методы определения чувствительности микробов к лекарственным веществам.

2. Составить схему ускоренных методов устойчивости к антибиотикам на биохимической, гемолитической и химической основах.

3. Составить схему определения концентрации антибиотиков в биосубстратах.

Приложение 2

Культивирование спирохет

1. Культивирование спирохет на питательных средах

• среда Нагучи (2% агар, 1 часть асцита, кусочки почек кролика, средапокрывается слоем вазелинового масла);

• среда Аристовского (кроличья сыворотка, кусочек мозговой ткани подслоем вазелинового масла);

• среда Уленгута (дистиллированная вода с сывороткой илиантикоагулянтом);

• среда Гельтцера (инактивированная сыворотка кролика, физ. раствор,кусочки куриного белка, 2 - 3 капли цитратной крови кролика или человека).

Трепонемы с большим трудом культивируются на сложных питательных средах. При длительном выращивании на искусственных питательных средах они теряют вирулентность. Такие штаммы трепонем называются культуральными.

2. Культивирование в развивающемся 7-8 дневном курином эмбрионе.

3. Интратестикулярное заражение кролика-самца и культивирование трепонем в яичках.

Питательные среды для культивирования лептоспир

• водно-сывороточная среда Уленгута (водопроводную воду стерилизуют, добавляют свежую инактивированную при +56 0С 30 мин. кроличью сыворотку);

• среда Форварта-Вольфа (дистиллированная вода, хлористый натрий, пептон, фосфорная (буферная смесь). Перед посевом в пробирки со средой добавить инактивированную кроличью сыворотку;

• полужидкая агаровая среда (вода, агар-агар, кипятить 30 мин., разлить в пробирки, стерилизовать кипячением 30 мин., добавить стерильную сыворотку кролика, подогреть при 56 ⁰С 30 мин. для инактивации;

• среда Терских - для исследования воды на наличие лептоспир (к исследуемой воде добавить фосфатно-буферную смесь, желток свежего куриного яйца, расплавленный слабощелочной мясо-пептонный агар).

Приложение 3

Культивирование грибов

Питательные среды для культивирования грибов:

1. Неселективные среды:

• пивное сусло (неопохмеленное сусло стерилизуют при 110 ⁰С 30 минут, затем используют его для приготовления:

а) сусло жидкое (разводят водой),

б) среда Сабуро жидкая (вода, глюкоза, пептон),

в) сусло-агар (добавляют 2-3% агар-агара);

• среда Сабуро плотная (агар, пептон, глюкоза, мальтоза, вода),

• рисовая среда Левиной (варят цельный рис, разбавляют водой,фильтруют, добавляют агар-агар),

• среда Левина (МПА, лактоза, эозин, метиленовая синь),

• среда Эндо (МПА, лактоза, кислый фуксин, обесвеченный щелочью),

- картофельно-глюкозный агар (отваренный в течение 1 часа картофельрастирают, разбавляют водой, процеживают, добавляют глюкозу иагар),

• МПА с 2% глюкозой,

• желатиновая среда (в бульон на отваре сердечной мышцы быка добавляют желатин),

• 5-10% КА (агар, дополненный экстрактом сердца и мозга),

• асцитический агар (агар, асцитическая жидкость).

2. Селективные среды, дополненные одним или комплексом антибиотиков: пенициллином (20 ЕД/мл), стрептомицином (40 ЕД/мл) или гентамицином (0,5 мкг/мл), левомицитином (16 мг/мл).

Приложение 4

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОПЛАЗМ

1. 2% сердечно-мозговой агар.

2. Мясо-пептонный бульон с 30% сывороткой крови или асцитической жидкости.

В среды добавляют нативную сыворотку, углеводы, витамины, соли, а дляугнетения роста сопутствующих бактерий - пенициллин и ацетат калия.

Для культивирования уреаплазм используют среды, содержащие гидролизатбычьего сердца, гидролизат казеина, пекарские дрожжи и красители:кристаллический и бромтимоловый синий. Среды дополняют 10%лошадиной сывороткой, 0,05% мочевины, 2% а-цистеина и антибиотиков(пенициллин).

Рост в виде яичницы-глазуньи.

Приложение 5