Аэробных бактерий

Ι этап. Накопление или рассев микробного материала.

ΙΙ этап. Получение изолированной колонии.

ΙΙΙ этап. Накопление (получение) чистой культуры.

ΙVэтап. Идентификация микробного вида.

Параметры идентификации микробного вида:

- морфология и тинкториальные свойства

- культуральные свойства

- антигенная характеристика

- биохимическая характеристика

- факторы патогенности

- фаготипирование

- чувствительность к антибиотикам

V. Заключительный этап: на основе учета результатов, изучения морфологии, структуры, тинкториальных, культуральных, биохимических, серологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагии дают полное заключение.

СХЕМА ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ

Iэтап. Накопление инфекционного материала.

IIэтап. Получение изолированной колонии.

IIIэтап. Накопление чистой культуры.

IVэтап. Идентификация микробного вида.

Vэтап. Заключение.

Приложение 10

Физические методы культивирования анаэробов

Полужидкая среда столбиком под слоем вазелинового масла с резиновой пробкой, посев уколом.

1. Редукцией среды – удаление кислорода с кипячением и с последующим нанесением слоя вазелинового масла.

2. Микроанаэростат Аристовского.

3. Трубки Вейон – Виньяла с запаянными или парафинированными концами.

4. Эксикатор с горящей свечой.

5. Метод Перетца с заливкой инфицированной расплавленной среды между спичками на дне чашки под предметное стекло. Чашка герметически закрывается, под пластилином или парафином.

Химический метод культивирования анаэробов

1. Эксикатор, на котором помещается один из поглотителей кислорода, например пирогалол. Крышка плотно притерта.

2. Пробирка Бюхнера с шаровидным расширением и шейкой внизу, куда также помещается поглотитель О₂, а над шейкой устанавливается косячок с посевом. Пробка резиновая.

Приложение 12

Биологический метод культивирования анаэробов (м-д Фортнера)

Метод основан на одновременном посеве в чашку со средой, разделенной по диаметру канавкой, испытуемого материала или чистой выделенной культуры анаэробов и какого-либо штамма-аэроба – жадного потребителя кислорода (Bac. prodigiosum, Sarcina lutea– из воздуха).

Чашкaс посевом герметически закрывается с помощью утрамбованной ваты, пластилина или парафина, и становиться для инкубации в термостат.

Вначале в связи с присутствием в чашке О₂бурно растут анаэробы.

Приложение 13

Биохимическое определение газообразных веществ при оценке протеолитической активности

Метод Сальковского для определения индола

Бульонную культуру микроорганизмов нагревают с 4 мл 10% серной кислоты, затем с 0,5 – 2 мл, 0,05 раствора азотисто-натриевой соли. Реактивы приливают по стенке пробирок.

Появление красно-фиолетового кольца указывает на наличие индола.

Определение индола по методу Эрлиха

Культуру выращивают на МПА, после чего делают густой посев в пробирки жидкой средой с казеином, нагретой до 30-35С⁰.

Пробирки инкубируют 2 часа в термостате, а затем добавляют сначала 5 мл раствора №1, а затем 5 мл раствора №2. Через 5 минут, при наличие индола, появляется красное окрашивание среды.

Раствор №1:

парадиметиламинобензальгид – 1г

Этиловый спирт (95^о) - 95мл

Соляная кислота (удельный вес 1,19) -20мл

Раствор №2: насыщенный растворK₂Cr₂O₂.

Определение сероводорода по методу Хоменко

К расплавленному МПА добавляют уксусно-кислый свинец, охлаждают до 45 ⁰ C, добавляют яичный белок в количестве 2%, тщательно смешивают со средой, разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром (3 дня по 30 мин).

Посевы делают уколом. При наличии способности образовывать H₂Sсреда по линии укола чернеет.