Материал для исследования при дифтерии

Исследуют слизь или отделяемое из пораженных органов (нос, глотка, глаз). Материал собирают тампоном. Его делают из плотной, негнущейся проволоки длиной 15 см, которую прокалывают через пробку. На одном конце (его в последующем опускают в сухую, чистую пробирку), накручивают вату; на другом, наружном, проволоку загибают в колечко для удобства держания и предупреждения травм рук персонала.

Тампоны, погруженные в пробирки, завертывают в бумагу (по 10 штук) и стерилизуют сухим жаром. Запас тампонов должен быть в лаборатории, в детских учреждениях постоянно.

Чаще всего материал берут из зева и носа. Больной должен широко открыть рот, его язык фиксируют шпателем и стерильным тампоном снимают налет или слизь на границе пораженного участка. По возможности – посев проводить тотчас. Для пересылки в лабораторию следует оберегать тампон от высыхания (пред тем, как брать материал, тампон нужно смочить в стерильном 5 % растворе глицерина или в физиологическом растворе).

Приложение 2

Микробиологическое исследование при дифтерии

Бактериоскопический метод Мазок, окраска по методу Грамма, Нейссера, Леффлера, РФ (люминесцентная микроскопия)

Бактериологический метод Посевы на: - кровяной агар, - свернутую сыворотку, -среду Клауберга (накопление изолированных колоний) - среду Бучина Изучение изолированных колоний: -характер колонии, наличие гемолиза, -мазки из колоний (окраска по Граму, Нейссеру), - посев на пестрый ряд, -определение протеолитической активности, - проба Пизу на цистиназу, - проба Закса на уреазу, - определение токсигенности (РП в агаре, ИФА, ПЦР – обнаружение toxгена) - реакция агглютинации с типовыми АТ на стекле. Учет результатов. Идентификация вида. Диагноз.

Приложение № 3.

Дифференцирующие пробы.

1. Проба Пизу для определения цистиназы

В столбик МПА с цистином уколом засевают изучаемую культуру. Пробирку ставят в термостат при + 370 С. Через 20 – 24 часа по ходу укола среда чернеет и на глубине 1 – 1,5 см от поверхности в среде появляется коричневое облачко (дифтерийные бактерии, расщепляя с помощью цистиназы цистеин, восстанавливают ацетат свинца, добавленный в среду, в сульфит свинца черного цвета).

Дифтероиды никогда не образуют «облачка», хотя могут обусловить (+) слабое почернение среды по ходу укола.

2. Проба Закса для выявления фермента уреазы.

• Готовят спиртовой раствор мочевины и индикатор феноловый красный.

Их смешивают перед употреблением и вносят в среду в соотношении 1: 9;

• 1 петлю чистой культуры вносят в среду и тщательно растирают по стенке пробирки;

• После 20 – 30 минут инкубации при + 37⁰С наблюдают за изменением цвета среды.

Дифтерийные бактериине изменяют цвета среды, не расщепляют мочевину, т.к. фермента уреазы не имеют.

Дифтероидыс помощью уреазы расщепляют мочевину с образованием аммиака, который щелочит среду и изменяет цвет среды (красный – за счет индикатора – фенолового красного.

Приложение 4

Биохимические свойства дифтерийной палочки и сходных с ней коринебактерий

Виды и биоварианты	Зерна волю тина	Гемо лиз	Ферментация углеводов					Проба на:
			Саха роза	Глюко за	Маль тоза	Ман нит	Крах мал	Цисти назу (Пизу)	Уреазу (Закса)
I. C.diphtheriae Биовар V.gravis	+	-	-	К+	К+	-	+	+	-
Биовар V.mitis	+	+	-	К+	К+	-	-	+	-
II. C.Hoffmani	-/+	-	К+	К+	К+	-	-	+/-	+
III. C.xerosis	-/+	-	-	-	-	-	-	-	+

Приложение 5

Схема лабораторной диагностики коклюша.

(материал – слизь из верхних дыхательных путей)

Бактериоскопический метод Окраска по Граму (грамотрицательные коккобактерии). РИФ.

Бактериологический метод 1.Кровяной МПА (метод кашлевых посевов пластинок). 2.Казеиново-угольный агар (КУА). 3.Молочно-кровяной агар (МКА). 4.Среда Борде-Жангу.

Серологический метод (ретроспективно) РА РСК (Борде-Жангу) РП. ИФА. РИФ, РНИФ.

Молекулярно-биологический метод ПЦР В случае обнаружения ДНК возбудителя можно поставить предварительный диагноз