- •Методические рекомендации для студентов к практическому занятию
- •4. Цели занятия:
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением
- •Этапы проведения практического занятия.
- •Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.
- •Окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена
- •Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
- •Б) метод «висячей капли»
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
Техника окраски:
Приготовленный мазок фиксируют над пламенем спиртовки.
На фиксированный мазок наливают метиленовый синий Леффлера и кипятят над пламенем спиртовой горелки 20 - 30 секунд.
Остывший препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного в течение 30 – 60 секунд.
Опять промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
Микроскопируют с иммерсией.
Оценка результатов. Споры окрашиваются в голубой, либо в синий цвет. Протоплазма вегетативного тела бактерий — розовая или красная.
Приложение 4
А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
Техника окраски:
1) Приготовить препарат из бактериальной культуры или дрожжей.
2) Высушить, зафиксировать в жидкости Карнуа 7 мин.
3) Промыть 80 % этанолом.
4) Обработать 1 NНСl, подогретой до 600С, в течение 7 мин, затем опустить препарат на 1-2 мин в холодную 1N HCl.
5) Обработать фуксинсернистой кислотой (реактив Шиффа) в течение 3-4 часов.
6) Промыть водой, высушить, микроскопироватьс иммерсией.
Оценка результата. Ядерное вещество окрашено в фиолетовый цвет.
Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
Техника окраски:
приготовленный препарат высушивают на воздухе;
фиксируют жидкостью Карнуа или смесью Никифорова;
фиксированные мазки подсушивают на воздухе и окрашивают рабочим раствором Романовского - Гимзы (к 10 мл дистиллированной воды добавляют 10 капель коммерческого красителя Романовского - Гимзы), погружая стекло в стаканчик с красителем.
Через 1 ч краситель сливают, и препарат промывают дистиллированной водой.
Готовый препарат высушивают на воздухе и микроскопируют.
Оценка результатов. Протоплазма форменных элементов ткани окрашивается в голубовато-синий цвет, ядра клеток - в фиолетово-красный, тела микробных клеток приобретают фиолетово-красный цвет.
Приложение 5
А) выявление зёрен волютина по нейссеру
Техника окраски:
1. Готовят мазок, высушивают, фиксируют жаром.
2. Наливают на мазок 1-2 капли уксуснокислого метиленового синего Нейссера, красят 1 - 2 минуты.
3. Краску сливают, наносят раствор Люголя на 1 мин.
4. Промывают водой, подсушивают фильтровальной бумагой.
5. Наносят раствор везувина (хризоидина) для окраски тела бактерии на 1 – 3 мин.
6. Смывают водой, высушивают, микроскопируют.
Оценка результатов. В мазке цитоплазма бактерий окрашивается в жёлто-коричневый цвет, зёрна волютина - от сине-зелёного до сине-чёрного цвета.
Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
Техника окраски:
1. Исследуемый материал наносят на чистые обезжиренные предметные стекла, растирают его тонким равномерным слоем по поверхности стекла, высушивают на воздухе.
2. Препарат фиксируют 3 мин в 96% этиловом спирте и высушивают.
3. На высушенный препарат наносят каплю 1% щелочного раствора метиленового синего по Леффлеру и окрашивают в течение 3 - 10 минут.
3. Промывают погружением в стакан с водопроводной водой.
4. Высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результата.При правильном окрашивании в микроскопируемом препарате видны голубые бактерии на бесцветном или слабо голубом фоне.
Приложение 6