Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
MR_LF_stud_Микроскопический метод исследования.docx
Скачиваний:
106
Добавлен:
19.06.2017
Размер:
57.31 Кб
Скачать

Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама

Техника окраски:

1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым раствором генцианового фиолетового в течение 1-2 минут.

2. Сливают остаток краски, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 минуты до почернения препарата.

3. Сливают раствор Люголя, окрашенный мазок обесцвечивают 960спиртом (препарат несколько раз помещают в стакан со спиртом до прекращения отхождения фиолетовых струек). Обесцвечивание проводят не более 20 – 30 сек.

4. Препарат промывают водой.

5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина 1 - 2 минуты.

6. Краситель сливают, препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.

Приложение 2

Окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена

Техника окраски:

1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, не превышающий по размеру предметное стекло.

2. Наливают карболовый фуксин Циля (основной краситель) и осторожно нагревают мазок на горелке/спиртовке 3-5 минут до появления паров, после чего оставляют краситель, пока препарат несколько остынет.

3. Снять бумагу с фуксином и промыть препарат водой.

4. Окрашенный препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) 3-5 сек или смесью 10 частей спирта и 1 части соляной кислоты в течение 1-2 мин или 95 %этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты (HCl), несколько раз погружая предметное стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом, пока мазок на вид не станет бледно-розовый.

5. Препарат тщательно промыть водой.

6. Споласкивают его 96% этиловым спиртом (в лаборатории часто этот этап упускают).

7. Снова ополаскивают водой.

8. Докрашивают 3-5 мин водным раствором метиленового синего Леффлера (дополнительный краситель).

7. Препарат промыть водой, подсушить и микроскопировать.

Оценка результатов. Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые – в сине-голубой.

Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе

Техника окраски:

1. Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3-5 минут или окрашенной фуксином бумагой до появления паров, но, не доводя краситель до кипения.

2. Препарат остудить, снять бумагу, слить краситель и промыть водой.

3. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1-2 мин.

3. Остаток кислоты слить, препарат промыть водой и обработать этанолом 20 сек.

4. Докрашивают 3-5 мин водным раствором метиленового синего Леффлера (дополнительный краситель).

5. Препарат промыть водой, подсушить и микроскопировать.

Оценка результатов.М. tuberculosisк этанолу устойчивы и не обесцвечиваются, оставаясь красными.М. smagmatisпод влиянием спирта эту краску теряют, но при докраске метиленовой синью становятся синими.

Приложение 3

Соседние файлы в предмете Микробиология