- •4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
- •4.1. Вопросы для самостоятельной подготовки и вводного контроля знаний:
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением
- •Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.
- •Окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена
- •Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
- •Б) метод «висячей капли»
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
Техника окраски:
1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым раствором генцианового фиолетового в течение 1-2 минут.
2. Сливают остаток краски, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 минуты до почернения препарата.
3. Сливают раствор Люголя, окрашенный мазок обесцвечивают 960спиртом (препарат несколько раз помещают в стакан со спиртом до прекращения отхождения фиолетовых струек). Обесцвечивание проводят не более 20 – 30 сек.
4. Препарат промывают водой.
5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина 1 - 2 минуты.
6. Краситель сливают, препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.
Приложение 2
Окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена
Техника окраски:
1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, не превышающий по размеру предметное стекло.
2. Наливают карболовый фуксин Циля (основной краситель) и осторожно нагревают мазок на горелке/спиртовке 3-5 минут до появления паров, после чего оставляют краситель, пока препарат несколько остынет.
3. Снять бумагу с фуксином и промыть препарат водой.
4. Окрашенный препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) 3-5 сек или смесью 10 частей спирта и 1 части соляной кислоты в течение 1-2 мин или 95 %этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты (HCl), несколько раз погружая предметное стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом, пока мазок на вид не станет бледно-розовый.
5. Препарат тщательно промыть водой.
6. Споласкивают его 96% этиловым спиртом (в лаборатории часто этот этап упускают).
7. Снова ополаскивают водой.
8. Докрашивают 3-5 мин водным раствором метиленового синего Леффлера (дополнительный краситель).
7. Препарат промыть водой, подсушить и микроскопировать.
Оценка результатов. Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые – в сине-голубой.
Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
Техника окраски:
1. Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3-5 минут или окрашенной фуксином бумагой до появления паров, но, не доводя краситель до кипения.
2. Препарат остудить, снять бумагу, слить краситель и промыть водой.
3. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1-2 мин.
3. Остаток кислоты слить, препарат промыть водой и обработать этанолом 20 сек.
4. Докрашивают 3-5 мин водным раствором метиленового синего Леффлера (дополнительный краситель).
5. Препарат промыть водой, подсушить и микроскопировать.
Оценка результатов.М. tuberculosisк этанолу устойчивы и не обесцвечиваются, оставаясь красными.М. smagmatisпод влиянием спирта эту краску теряют, но при докраске метиленовой синью становятся синими.
Приложение 3