- •4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
- •4.1. Вопросы для самостоятельной подготовки и вводного контроля знаний:
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением
- •Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.
- •Окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена
- •Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
- •Б) метод «висячей капли»
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
Техника приготовления:
1. На середину предметного стекла наносят 1 каплю бульонной культуры бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой. При её наличии на МПА вначале наносят каплю физиологического раствора и эмульгируют в ней 1 петлю микробов, взятых со среды.
2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом и, прижимают его к предметному так, чтобы не образовались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.
З. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.
В случаях работы с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.
Б) метод «висячей капли»
При определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.
Техника приготовления:
1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.
2. Накрывают перевёрнутым предметным стеклом с луночкой, но с таким расчётом, чтобы капля оказалась в её центре. Для сцепления стёкол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.
З. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.
Оценка результата:неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные – проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.
Приложение 10
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ПОСЕВА:
1. Метод шукевича:
Испытуемую культуру бактерий засевают в конденсационную воду косого МПА, не прикасаясь к его поверхности.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатовведут по феномену роения, в процессе которого растущая культура ползёт по «косячку» вверх. Неподвижная культура развивается только в конденсате, а «косячок» МПА остаётся стерильным.
2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Испытуемую культуру осторожно бактериальной петлёй засевают в столбик 1-1,5 % МПА.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатовпроизводят по характеру роста: а)неподвижныебактерии растут строго по ходу укола; б)подвижныебактерии дают рост, напоминающий ёршик с расходящимися в стороны шипами. Оценка роста проводится визуально.