Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию

Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний:

1. Общие представления о катализе. Механизм ферментативного катализа.

2. Зависимость активности ферментов от температуры и рН среды, количества фермента и субстрата

Ориентировочная основа деятельности студентов (ООД) для проведения лабораторной работы: Ферментативная активность каталазы

Принцип метода. Каталаза- это фермент, который встречается в организме животных и человека преимущественно в печени и эритроцитах. Он разлагает перекись водорода (токсический побочный продукт клеточного дыхания) на воду и кислород.

2H₂O₂ ^{каталаза} 2H₂O + O₂

Подготовка эксперимента

1.Положить печень цыпленка в ступку, пестиком измельчить ткань печени до однородного состояния, постепенно добавить воду (общий объем воды 10 мл). Полученный экстракт («печеночный сок») профильтровать через сито.

2. 1 мл полученного « печеночного сока» налить в пенициллиновый флакон и поместить в водяную баню на 5 минут.

3. 1 мл полученного « печеночного сока» налить в пенициллиновый флакон и поместить в поддон со льдом до проведения эксперимента.

Работа № 1 «Изучение ферментативной активности каталазы»

Порядок выполнения:

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.)

3. Добавить 1 мл « печеночного сока» и немедленно закрыть

колбу пробкой (предварительно смазанной глицерином).

4. Немедленно начать измерения (время работы 120 сек).

5. Включить магнитную мешалку.

6. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

В колбе наблюдается отчетливое выделение пузырьков О₂. Кривая

давления резко возрастает, но затем вертикально падает, из-за того,

что резиновую пробку выбило давлением с колбы.

Работа № 2 «Влияние щелочной среды на активность фермента»:

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Добавить 10 мл 1 моль раствора NaOH.

3. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.).

4. Добавить 1 мл « печеночного сока» и немедленно закрыть колбу пробкой

( предварительно смазанной глицерином).

5. Немедленно начать измерения (время работы 120 сек).

6. Включить магнитную мешалку.

7. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

Визуально реакция протекает слабее. Кривая давления возрастает гораздо менее резко, чем при нормальных условиях, что говорит о снижении активности фермента при рН > 7.

Работа № 3 «Влияние кислой среды на активность фермента»

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Добавить 10 мл 1 молярного раствора HCI.

3. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.).

4. Добавить 1 мл « печеночного сока» и немедленно закрыть колбу пробкой

( предварительно смазанной глицерином).

5. Немедленно начать измерения (время работы 60 сек).

6. Включить магнитную мешалку.

7. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

Выделение O₂ не наблюдается, давление в колбе остается постоянным. Кривая давления не возрастает, что говорит об отсутствии активности каталазы при рН < 7.