- •Государственное бюджетное образовательное учреждение
- •3.2. Конкретные цели и задачи.
- •4.Этапы проведения практического занятия.
- •7.1.Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола и его оформлением.
- •Приложение № 1 Лабораторная диагностика сифилиса
- •1. Материал и его отбор
- •2. Микробиологическое исследование при сифилисе.
- •Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса большое значение имеет реакция Вассермана со спинномозговой жидкостью
- •4. Реакция иммобилизации бледных трепонем (pибt):
- •5. Сведения о реакции иммунофлюоресценции, см. Общий курс. Приложение № 3
- •Приложение 4
- •Приложение № 6
- •Приложение№ 7 Лабораторная диагностика лептоспирозов
- •Микробиологическое исследование.
Приложение № 1 Лабораторная диагностика сифилиса
1. Материал и его отбор
Отделяемое из твердого шанкра (берут в специализированных лабораториях, в клиническом отделении).
Для получения необходимо:
- тщательно промыть язву или эрозию ваткой (избегать сильного растирания и кровотечения), смоченной стерильным физиологическим раствором (0,85% NaCl);
- очищенную поверхность осторожно растираем прокаленным и остуженным металлическим шпателем (можно снимать край шанкра пинцетом);
- отделяемое (оно появляется не сразу), набрать в пастеровскую пипетку и далее использовать для микроскопического исследовании;
- при наличии инфильтрата без язвы – пунктат шприцом.
2. Пунктат лимфатических узлов.
3. Отделяемое или соскоб с кожных поражений сыпных элементов при вторичном сифилисе.
4. Спинномозговая жидкость (пунктат).
5. Кровь(брать натощак, не менее 2-х мл) в сухие чистые пробирки для серологических проб, направляют в закрытых пробкой пробирках в специализированную лабораторию.
2. Микробиологическое исследование при сифилисе.
Материал: - Оделяемое: твердого шанкра, кожных поражений при вторичном сифилисе, пунктат лимфатических узлов.
Микроскопическое исследование
1.Нативный препарат 2. Препараты, 3. Препараты,
для микроскопии окрашенные по: обработанные по:
- в темном поле - Граму, - Бурри,
- с фазово-контрастным - Романовскому-Гимзе, - Морозову.
устройством - флюорохромом - РИФ, РНИФ
Серодиагностика
Для скрининга используется реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, которую называют ЭДС – экспресс-диагностика сифилиса.
Материал :
Сыворотка крови, ликвор
С визуальной оценкой реакций: Оценка реакций при микроскопии
Специфических - р.иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
р.Вассермана;
РПГА - непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ)
- прямой иммунофлюоресцентный (РИФ)
Приложение № 2
Иммунологическая диагностика сифилиса.
1. В качестве антигенов для реакции Вассермана используют:
- спиртовый экстракт липидов из мышцы сердца быка с добавлением 0,25 – 0,3 % холестерина (близок по составу к трепангам);
- кардиолипиновый (высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липидов и смешанный в постоянной пропорции с лецитином, холестерином (постоянство химического состава обеспечивает унификацию результатов);
- протеиновый специфический комплекс (ультрозвученный антиген) из культуры бледных трепонем.
Кардиолипиновый антиген лишен антикомплементарности и гемотоксичности (поэтому нет необходимости в контролях).
Схема основного опыта реакции Вассермана (при объеме 2.5 мл)
№ п/п |
Ингредиенты |
№ пробирок | |||||||||
|
|
1 |
2 |
3 |
контроли | ||||||
|
|
|
|
|
Сыворотки |
Антигена на анти-комплементарность |
Гемотоксич-носгь | ||||
1. |
Испытуемая, инактивированная при + 56о С 30 минут сыворотка больного, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
- |
- |
- |
| ||
2. |
Физиологический раствор (0,85 % NaCl) |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,9 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
1,0 | ||
3. |
Антиген № 1 кар-диолипиновый антиген,разведенный по титру |
0,5 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
| ||
4. |
Антиген № 2 спиртовый экстракт липоидов из мышцы сердца быка |
- |
0,5 |
- |
- |
0,5 |
- |
0,5 |
- | ||
5. |
Антиген № 3 ультраозвученный антиген из культуры бледных трепонем |
- |
- |
0,5 |
- |
- |
0,5 |
- |
0,5 | ||
6. |
Комплемент в рабочей дозе |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
- | ||
В термостат на 45 минут, при + 37о С. | |||||||||||
7. |
Гемолитическая система (сенсибилизированная) |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 | ||
Результат у больного сифилисом |
Задержка гемолиза
|
Гемолиз |
Гемолиз |
Гемолиз |
Нет гемолиза |
Нет гемолиза |