- •Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное агентство по образованию
- •Работа 2. Культивирование дрожжей на питательных средах, содержащих углеводные экстракты
- •Работа 3. Использование жировых отходов мясопереработки в качестве сырья для получения белковой кормовой добавки
- •Часть 1. Определение характеристик жиросодержащих отходов
- •Часть 2. Культивирование дрожжей на жиросодержащих питательных средах
- •2. Биосинтез и выделение ферментов из культуральной жидкости микробного продуцента и из биологического сырья. Применение иммобилизованных ферментов работа 4. Регуляция синтеза экзогенных ферментов
- •Работа 5. Выделение технической рибонуклеазы из поджелудочной железы крупного рогатого скота
- •Работа 6. Получение 6-аминопенициллановой кислоты гидролизом бензилпенициллинацилазы, иммобилизованной в полиакриламидный гель
- •3. Комплексная переработка биологического сырья с получением продуктов углеводной, белковой, липидной и нуклеотидной природы работа 7. Выделение полифруктозанов из растительного сырья
- •Работа 8. Экстракционное извлечение липидов из биомассы
- •Работа 9. Комплексная переработка микробного сырья с получением продуктов белковой и нуклеотидной природы
- •Часть 1 . Выделение дрожжевой рнк
- •Часть 2. Выделение “глобулиновой” фракции белка дрожжей
- •Работа 10. Получение концентрата белка из соевых бобов
- •4. Биомедицинские технологии работа 11. Основы иммунохимических методов исследования на примере реакций агглютинации и преципитации
- •Работа 12. Реакция связывания комплемента
- •5. Контроль биотехнологических производств работа 13. Основы микробиологического контроля биотехнологических производств
- •Работа 14. Анализ состава микробной кормовой биомассы
- •Методы анализа
- •Шакир Ирина Васильевна
Часть 2. Выделение “глобулиновой” фракции белка дрожжей
Ход работы
1. Подготовить установку к работе. Используется та же установка, что и в предыдущей лабораторной работе.
2. Подготовка денуклеинизированной биомассы (ДНБМ). ДНБМ, полученную в предыдущей работе, взвесить на технических весах, разбавить 10-кратным количеством дистиллированной воды. Суспензию перемешивать с помощью мешалки в течение 30 мин, после чего промывные воды отделить центрифугированием (6000 об/мин в течение 15 мин).
3. Взвесить ДНБМ после промывки и развести ее дистиллированной водой до содержания сухих веществ 10%, считая, что влажная ДНБМ после промывки содержит 70% влаги.
4. С помощью рН-метра установить значение рН суспензии на уровне 1,5÷1,7 добавлением серной кислоты.
5. Подготовленную суспензию поместить в реактор и провести экстракцию белковых веществ при 90оС в течение 5 ч.
6. По истечении времени экстракции отключить подачу воды в рубашку реактора и обратный холодильник, отсоединить мешалку, термометр и холодильник, перелить содержимое реактора в коническую колбу или стакан и охладить до комнатной температуры.
7. Охлажденную суспензию разлить по 25 мл в центрифужные стаканы и отцентрифугировать при 6000 об/мин в течение 15 мин. Клеточные оболочки смыть большим количеством воды над раковиной, а бесклеточный белковый экстракт поместить на 30 мин в холодильник, предварительно измерив его объем.
8. Измерить концентрацию белковых веществ в экстракте методом Лоури (методика прилагается к работе). Пробу экстракта необходимо для анализа развести в 100 раз.
9. Провести осаждение “глобулиновой” фракции в ИЭТ. Для этого необходимо поместить в охлажденный экстракт электроды рН-метра и довести значение рН среды до 4,2÷4,7 раствором 10 н NaOH. Стакан с осадком белка поставить на 30÷40 мин в холодильник.
10. Осадок белка отделить от надосадочной жидкости центрифугированием при 6000 об/мин в течение 10 мин.
11. Промыть осадок спиртом или ацетоном, добавив в каждый центрифужный стакан по 10 мл растворителя. Отработанный растворитель отделить центрифугированием (6000 об/мин, 10 мин). Операцию повторить дважды.
12. Осадок белка высушить в центрифуге, включив ее на 20 мин при 1000 об/мин с открытой крышкой. Определить массу полученного осадка.
13. Измерить объем надосадка, полученного в п. 10, определить в нем концентрацию белка методом Лоури. Раствор необходимо развести для анализа в 50 раз.
В работе необходимо рассчитать:
а) степень экстракции белковых веществ:
Хэ = [P]э Vэ/(m А/100),
где [P]э – концентрация белка в экстракте, мг/л;
Vэ – объем экстрагента, равный сумме объемов экстракта и воды, содержащейся в промытой пасте ДНБМ, л;
m – масса ДНБМ по сухому веществу, мг;
А – содержание белковых веществ в ДНБМ, % (задается преподавателем);
б) степень осаждения белка в ИЭТ:
Хиэт = ([P]э∙V1-[P]н/о∙V2)/[P]э∙V1,
где V1 – объем экстракта, л;
V2 – объем надосадочной жидкости, л;
[НК]н/о – концентрация белка в надосадке, мг/л;
в) оценить выход препарата:
У = mп/M ,
где mп – масса препарата “глобулиновой” фракции, мг.
Контрольные вопросы
Способы гидролиза белка. Их достоинства и недостатки.
Пути использования продуктов гидролиза белка в пищевой, микробиологической, медицинской и других отраслях промышленности.
Пути использования и дальнейшей переработки получаемой в работе “глобулиновой” фракции белка.
Почему из дрожжей выделяют обычно именно “глобулиновую” фракцию белка?
Почему при комплексной переработке микробной биомассы на первой стадии извлекают нуклеиновые кислоты и только потом ‑ белки?