Самостоятельная работа студентов

1. Морфологические свойства возбудителя дифтерии – Corynebacterium diphtheriae (мазок из чистой культуры, окраска по Нейссеру). Дифтерийные коринебактерии в препарате расположены в виде римской цифры V или X, по полюсам содержат темно-синие включения волютина.

2. Бактериологический метод. Изучение культуральных, ферментативных и антигенных свойств дифтерийной культуры:

• учет роста дифтерийной палочки на среде Клауберга (МПА с теллуритом натрия, глицерином и дефибринированной кровью). Колонии мелкие, круглые с уп­лотнением в центре, при сплошном росте поверхность культуры выглядит в виде шагреневой кожи. Колонии биовара gravis серые, радиально исчерчены, напоминающие розетку, колонии биовара mitis - черные, круглые, выпуклые. Де­монстрацию описать, зарисовать;

• биохимические свойства коринебактерий представлены де­монстрацией в соответствии с таблицей. Описать, зарисовать;

• определение токсигенности культур дифтерийных бактерий с помощью реакции преципитации в геле. На цистиновый МПА в чашке Петри нанесена полоска фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической про­тиводифтерийной сывороткой, перепендикулярно которой засеяны исследуемые культуры. Если культура токсигенна, в мес­тах соединения токсина с антитоксином образуется преципитат в виде белых линий (усы);

• цистиназная активность (проба Пизу) на столбике МПА с цистином посевом в виде укола. При наличии фермента отмечается почернение среды по ходу укола (образование сульфида свинца) и коричневое облако вокруг. Учесть демонстрационную реакцию;

• наличие уреазы определяют в растворе с мочевиной и индикатором феноловым красным. При наличии фермента сре­да приобретает красный цвет. Учесть демонстрацию.

3. Серологический метод. Учесть демонстрационную РНГА для определения напряженности антитоксического иммунитета при дифтерии.

4. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения дифтерии.

• дифтерийный анатоксин - АД (токсин, обезвреженный формали­ном, очищенный от балластных веществ и адсорбированный с целью повышения иммуногенности на гидроксиде алюминия). Применяется для проведения активной иммунизации против дифтерии, входит в состав АДС (адсорбированного дифтерийно-столбнячного) анатоксина или АКДС (адсорби­рованной коклюшно-дифтерийно-столбнячной) вакцины.

• противодифтерийная антитоксическая сыворотка, полу­чаемая яз крови лошадей гипериммунизированных дифтерий­ным анатоксином, очищенная и концентрированная методом Диаферм-3 (диализ и ферментирование - для снижения молекулярной массы и удаления балластных веществ). Применяют для профилактики и лечения дифтерии.

• агглютинирующие противодифтерийные сыворотки (поли­валентные и типовые). Применяются в диагностических це­лях для дифференциации дифтерийных бактерий от дифтероидов и для установления типа.

Микробиологическая диагностика коклюша и паракоклюша

Методы, применяемые для лабораторной диагностики коклюша, представлены в схеме 14.

Схема 14. Микробиологическая диагностика коклюша

Материал для исследования: мокрота, слизь из носоглотки

Бактериологический метод

1 день.Посев материалана среду КУА или Борде-Жангу. Культивирование в течение 48-72 часов при 37⁰ С.

2 день. Учет характера роста колоний на средахКУА или Борде-Жангу.Рост в виде мелких, выпуклых, блестящих колоний (капельки ртути). Мазок в окраске по Граму, постановка РА с агглютинирующими коклюшыми сыворотками, определение биологических свойств.

3 день. Учет проб на токсигенность, цистиназу. Формулировка ответа. Пересевы с кровяного МПА на специальные среды с целью полной идентификации дифтерийной палочки и ее дифференциации от сходных непатогенных коринебактерий.

4 день. Окончательный ответ.