Практическое применение газовой и газожидкостной хроматографии

Исследуемая проба вводится в поток газа-носителя в специальном устройстве (нагревателе, испарителе), ее компоненты превращаются в летучие соединения и в токе газа-элюента проходят через колонку с сорбентом, где многократно протекают процесс сорбции, десорбции и распределения, в зависимости от которых вещества анализируемой смеси удерживаются в колонке разное время. Разделенные вещества током газа-носителя элюируются из колонки, регистрируются детектором и автоматически фиксируются на бумаге самописца в виде пиков (хроматограмм). Она служит основой для качественного и количественного анализа.

В фармакопейном анализе методы ГХ и ГЖХ применяются для определения подлинности лекарственных средств, определения примесей и количественного определения, а также определении остаточных растворителей в лекарственных средствах.

Особенности высокоэффективной жидкостной хроматографии (жидкостной хроматографии высокого давления)

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является вариантом жидкостной колоночной хроматографии. Неподвижная фаза – твердый сорбент, подвижная - жидкость, подаваемая в колонку под повышенным давлением. Разделение компонентов смеси достигается за счет различия в сродстве компонентов смеси к неподвижной и подвижной фазам. Основными требованиями в методе является растворимость исследуемых веществ в подвижной фазе, а также свойство удерживаться неподвижной фазы. Если при вводе пробы какие-либо компоненты смеси окажутся нерастворимыми, они будут отфильтрованы и уже не участвуют в хроматографическом процессе. Точно также не будут разделяться компоненты, не удерживающиеся неподвижной фазой, т.к. они пройдут через колонку с подвижной фазой.

Основными узлами хроматографа для ВЭЖХ являются: насос высокого давления для подачи подвижной фазы, устройство для ввода пробы (дозатор), хроматографическая колонка, детектор с регистрирующим устройством.

Несмотря на некоторую общность узлов приборов с предыдущими вариантами хроматографии (ГХ и ГЖХ) здесь имеются отличия:

- подвижная фаза подается под давлением (до 200-500 атм);

- колонки иных размеров (обычно длиной 10-25 см, диаметр 4-5,5 мм, в

микроколоночных хроматографах используют длиной 5-6 см и

диаметром 1-2 мм);

- размер частиц сорбента 5-10 мкм и их плотная упаковка в колонке,

что обеспечивает эффективность разделения;

-выбор сорбента ограничен;

- другие температурные условия.

В качестве сорбента в ВЭЖХ обычно используют силикагель с гидроксилированной поверхностью или привитыми к поверхности различными функциональными группами, например, алкилсиликагель, примером которого является Сепарон-18. К его поверхности привита алкильная группа с числом углеродных атомов 18.

В колонках, содержащих силикагель с привитыми неполярными группами (Сепарон-18), используют полярные растворители – водные растворы, содержащие низшие спирты и ацетонитрил. Если в качестве сорбента используют силикагель, то элюентом служат углеводороды с добавлением небольшого количества спирта.

В ВЭЖХ используются детекторы различных типов, их основные характеристики представлены в таблице 3.

Таблица 3