Глава 2. Материалы и методы

Объектами исследования явились корневище и корни кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis), заготовленные в Ташлинском и Александровском районах Оренбургской области.

Корни и корневища кровохлебки заготавливали в период плодоношения (конец августа). Сушили сырье кровохлебки на солнце, разложив его тонким слоем на бумаге и периодически перемешивая [2].

2.2. Качественный анализ содержания дубильных веществ

Для проведения качественного анализа дубильных веществ (ДВ) из лекарственного растительного сырья готовили водные извлечения по следующей методике. Навеску сырья 2,0 г помещали в колбу и добавляли 250,0 мл воды очищенной. Экстрагировали при умеренном кипячении в течение 30 мин. Полученное извлечение охлаждали и проводили качественные реакции [2].

1. К 2 - 3 мл извлечения добавляют по каплям 1 % - ный раствор желатина. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатины .

2. При добавлении к 2 - 3 мл извлечения 4 - 5 капель раствора железоаммониевых квасцов в случае гидролизуемых дубильных веществ появляется черно - синее окрашивание или осадок, а конденсированных — черно - зеленое окрашивание или осадок (эта реакция используется для открытия дубильных веществ в растительном материале).

3. К 10 мл извлечения прибавляют 5 мл смеси кислоты хлористоводородной разведенной в соотношении 1 : 1, и 3 мл 40 % - ного раствора формальдегида. Полученную смесь кипятят 30 мин в колбе, снабженной обратным холодильником. При наличии конденсированных дубильных веществ они выпадают в осадок. Осадок отфильтровывают. К 2 мл фильтрата добавляют 10 капель 1 % - ных железоаммонневых квасцов и около 0,2 г кристаллического ацетата свинца, раствор перемешивают. В случае наличия гидролизуемых дубильных веществ появляется синее или фиолетовое окрашивание (в нейтральной среде).

4. К 2 - 3 мл извлечения прибавляют по каплям бромную воду (5 г брома в 1 л воды) до того момента, когда в жидкости станет ощущаться запах брома. При наличии конденсированных дубильных веществ сразу образуется осадок.

5. К 1 мл извлечения добавляют 2 мл 10 %-ной уксусной кислоты и 1 мл 10 % - ной средней соли ацетата свинца - гидролизуемые дубильные вещества образуют осадок. При наличии конденсированных дубильных веществ фильтрат окрасится в черно - зеленый цвет от прибавления 5 капель 1 % - ных железоаммониевых квасцов и 0,1 г ацетата свинца.

6. К 2 мл извлечения прибавляют несколько кристаллов NaNO3и 2 капли 0,1 н. соляной кислоты. При наличии гидролизуемых дубильных веществ появляется коричневое окрашивание.

2.2. Количественное определение содержания дубильных веществ

Количественное определение проводили спектрофотометрическим методом, основанным на измерении поглощения монохроматического света в ультрафиолетовой области [3].

Спектрофотометрическое определение. После получения водного извлечения часть его центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. К центрифугату добавляют 2 % водной раствор аммония молибдата, после чего разбавляют водой и оставляют на 15 мин. Интенсивность образовавшейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Расчет танидов производят по стандартному образцу. В качестве стандартного образца используют ГСО танина . Около 0,8 г (точная навеска) измельченного до размера частиц 2 мм сырья заливали 100 мл воды и нагрели на кипящей водяной бане в течение 30 мин с последующим 30 - минутным отстаивание при комнатной температуре. Полученное извлечение фильтровали через складчатый бумажный фильтр в мерную колбу емкостью 100 мл, доводили водой до метки.

5 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили до метки спиртом этиловым 70%, 2,5 мл полученного извлечения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре «GENESYS 5» в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны от 274,5 до 277,5 нм относительно спирта этилового 70%. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца танина.

Примечание. Приготовление раствора стандартного образца танина. Около 0.0025 г (точная навеска) стандартного образца танина, высушенного до постоянной массы при температуре 100 - 150 °С, помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили спиртом этиловым 70% до метки, 2,5 мл полученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%.

Содержание дубильных веществ в пересчете на воздушно - сухое сырье (Х, %) определяли по формуле:

Х = Dx * Mст* 100 * 50 * 25 * 2,5 * 100

Dст * Mx * 5 * 2,5 * 50 * 25

где Мст – масса танина, г; Мх – масса сырья, г; Dст – оптическая плотность раствора стандартного образца танина; Dх – оптическая плотность исследуемого раствора.

Математическую обработку проводили с помощью программы Microsoft Office Excel 2010.