- •Вопрос 1
- •Вопрос 2
- •Вопрос 3
- •Вопрос 2,3.
- •Вопрос 4
- •Вопрос 5
- •Вопрос 1
- •Вопрос 2. Морфология бактерий. Основные морфологические свойства. Методы изучения морфологии прокариот. Применение в медицинской практике.
- •Вопрос 5. Простые и сложные методы окраски. Подразделение сложных методов окраски по назначению. Протравы и дифференцирующие вещества. Метод Грама: сущность, этапы окраски, практическое применение.
- •Вопрос 6. Сложные методы окраски, протравы и дифференцирующие вещества. Метод Циля-Нильсена: сущность, этапы окраски, практическое применение.
- •1) Питание микроорганизмов. Способы поступления питательных веществ в бактериальную клетку. Классификация по типам питания. Зависимость от источника углерода и энергии. Факторы роста.
- •4) Культивирование бактерий: условия, питательные среды (их классификация по целевому назначению). Принципы работы питательных сред. Культуральные свойства бактерий. Примеры.
- •6.Методы культивирования облигатных анаэробов. Способы создания бескислородных условий, применяемая аппаратура. Этапы выделения чистых культур облигатных анаэробов.
- •8 Методы идентификации бактерий, используемые для определения рода, вида. Методы внутривидовой дифференциации бактерий. Практическое применение.
- •10.Энергетический метаболизм бактерий. Особенности дыхания облигатных аэробов и облигатных анаэробов. Брожение: типы брожения, примеры бактерий.
- •11. Понятие о стерилизации и дезинфекции. Методы термической стерилизации, их характеристика, применяемая аппаратура. Приведите примеры стерилизуемых материалов, инструментов.
- •16.Множественная лекарственная устойчивость. Блрс( бета-лактамазы расширенного спектра).Пути преодоления(ингибиторы бета-лактамаз,примеры защищ.Пенициллинов и цефалоспоринов.
- •Вопрос 1
- •2. Бактериофаги. Распространение фагов в природе. Умеренные бактериофаги, особенности их взаимодействия с клеткой. Лизогения, ее значение. Фаговая конверсия.
- •3.Отличительные свойства бактериофагов как представителей царства Vira. Вирулентные фаги, стадии взаимодействия с бактериальной клеткой. Практическое применение бактериофагов
- •5.Генотип и фенотип бактерий. Понятие о гене. Современное представление о генетическом аппарате бактерий. Бактериальная хромосома и плазмиды, транспозоны, Is-элементы.
- •7. Мутации у бактерий. Характеристика типов мутаций. Спонтанные и индуцированные мутации, механизмы возникновения, значение мутаций
- •Вопрос 1. Микрофлора тела человека. Микробные биоценозы. Причины изменения качественно-количественного состава микробиоценозов. Функции. Способы коррекции микробиоценозов
- •Вопрос 2. Микроэкология человека. Качественно-количественный состав микробиоты толстого кишечника у детей и взрослых, роль в норме и патологии. Функции нормальной микрофлоры
- •Вопрос 3. Микроэкология тела человека. Формирование микрофлоры новорожденных детей. Влияние механизма родов, типа вскармливания на состав микрофлоры ребенка первого года жизни.
- •Вопрос 4. Микрофлора отдельных экологических ниш здорового человека: кожи, дыхательных путей, мочеполовых путей. Роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности человека.(см.Выше)
- •Вопрос 5. Факторы, оказывающие влияние на количественный и видовой состав микрофлоры человека. Современные методы изучения микробиоты. Охарактеризуйте биопрепараты: пробиотики, пребиотики, синбиотики.
- •4. Врождённый иммунитет(см.Выше). Гуморальные факторы защиты: примеры, биологические свойства, механизмы действия. Значение.
- •5. Факторы врождённого иммунитета. Система комплемента, пути активации комплемента, биологические функции.
- •8. Клеточный адаптивный иммунный ответ. Формы проявления. Цитотоксическая реакция т-лимфоцитов: условия возникновения, основные факторы. Динамика реакции иммунного ответа.
- •11. Инфекционная аллергия. Аллергены. Практическое использование кожных аллергических проб в диагностике инфекционных заболеваний. Примеры. Механизм действия кожно-аллергической реакции IV типа.
- •12. Антигены: химическая природа и свойства, условия иммуногенности. Антигены бактериальной клетки, их химическая природа, свойства.
- •13. Антигены бактериальной клетки: локализация, химическая природа. Подразделение антигенов. Групповые, видовые, типовые антигены. Протективные антигены. Суперантигены. Антигенная мимикрия.
- •19.Серологические реакции, используемые в инфекционной иммунологии. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга), ингредиенты, механизм, цель, понятие о титре. Практическое применение.
- •20.Серологические реакции,используемые в инфекционной иммунологии.Реакция преципитации:ингредиенты сущность постановка. Практическое применение
- •25.Серологические реакции,применяемые в инфекционной иммунологии.(см.20)Иммуноблотинг, радиоиммунологический анализ:спецефичность,чувствительность,механизмы реакции.Практическое использование.
- •28. Вакцинация. Эффективность вакцинации. Национальный календарь прививок рф: цель проведения вакцинации детей и подростков, характеристика вакцин.
- •29. Анатоксины: свойства, принцип получения, единицы измерения. Ассоциированные вакцины, их свойства, примеры. Охарактеризуйте иммунитет, формируемый в результате введения ассоциированных вакцин.
- •31. Диагностические сыворотки, их подразделение, получение и практическое применение. Моноклональные антитела. Гибридомы, их использование для получения моноклональных антител.
- •13.Реакция нейтрализации вирусов как один из основных методов,применяемых в диагностике вирусных инфекций .Сущность методы постановки.
- •14.Методы индикации и идентификации вирусов.Реакция гемагглютинации вирусов (рга) и реакция торможения торможения гемагглютинации,сущность практическое применение.
- •15.Культуры клеток:применение культур в диагностике вирусных заболеваний.Цитопатическое действие вирусов на клетки,формы проявления цпд,реакция нейтрализации цпд. Практическое применение.
7. Мутации у бактерий. Характеристика типов мутаций. Спонтанные и индуцированные мутации, механизмы возникновения, значение мутаций
Мутации - стабильное изменение первичной структуры геномной ДНК , которое приводит к наследственно закрепленному изменению или утрате одного или нескольких признаков, не связанное с генетическим обменом или присутствием плазмид.
Типы мутаций:
Спонтанные мутации возникают в обычных условиях под влиянием природных факторов,ошибок в репликации генома, действия транспозонов и Is-элементов.
Индуцированные мутации получают с помощью обработки бактериальной культуры мутагенами - факторами химической, физической или биологической природы, способными вызывать повреждения ДНК .
В зависимости от степени мутационных повреждений мутации подразделяют на :
Хромосомные - крупные перестройки в отдельных фрагментах ДНК. (Делеции - выпадение нескольких нуклеотидов , инверсии - поворот участка хромосомы на 180*, дупликации - повторение участка хромосомы, дислокации - изменение последовательности нескольких оснований). Бывают летальными, обычно приводящими мутировавшие бактерии к гибели.
Генные (точковые) мутации - изменение одной пары оснований. Различают : выпадение или вставки оснований, простые замены (транзиции) - при которых пурин заменяется на другой пурин( аденин>гуанин) , пиримидин на другой пиримидин ( тимин>цитозин), сложные замены (трансверии) , когда пурины заменяются на пиримидины(а>т , ц>г). Точковые мутации возникают с большой частотой и имеют большое значение в Генотипической изменчивости бактерий, способствуя их эволюции.
Прямые мутации - связаны с потерей функцией.Обратные мутации - с восстановлением этой функции
№8 Генетические рекомбинации у бактерий. Способы переноса генетической информации из клетки в клетку. Трансформация: сущность, условия возникновения, этапы, значение.
Рекомбинации- это процесс взаимодействия между двумя молекулами ДНК, приводящий к образованию новой рекомбинантной молекулы.
Типы генетических рекомбинаций у бактерий: трансформация, трансдукция, конъюгация.
Трансформация- тип генетического обмена, при котором участок нативной молекулы ДНК донора проникает в бактерию-реципиент и вызывает изменение ее генотипа. Для того, чтобы трансформация была успешной, ДНК донора и бактерии-реципиента должны обладать определёнными свойствами:
- ДНК донора должна быть выделена из бактериальной культуры того же вида, что и реципиент (или близкородственного). Участок трансформирующей ДНК должен сохранять интактную структуру (двунитчатую спирализацию) и иметь значительную молекулярную массу.
- Клетки реципиентной бактериальной культуры для осуществления трансформации должны быть компетентными, то есть способными адсорбировать на своей поверхности ДНК донора и поглащать ее
Стадии трансформации:
Адсорбция фрагментов двунитивой ДНК донора на поверхности клеточной стенки компетентных клеток. ДНК связывается с участками поверхности, доступными только у компетентных клеток.
Ферментативное расщепление адсорбированной молекулы двунитивой ДНК на более мелкие фрагменты с помощью индуцированной клеточной эндонуклеазы.
Проникновение фрагментов ДНК сопровождается разрушением одной из нитей ДНК и освобождением энергии, необходимой для дальнейшего проникновения.
Проникший однонитевый фрагмент ДНК взаимодействует с участком высокой гомологии генома клетки реципиента с образованием гибридной молекулы ДНК (гомологичная рекомбинация), в которой одна нить содержит генотип реципиента, а вторая нить является рекомбинантной.
Трансформация является одним из факторов эволюции бактерий. Появляющиеся рекомбинанты с новым сочетанием генов играют определённую роль в естественном отборе. С помощью трансформации проводится тонкое картирование генов, уточняются генетические карты.
№9 Генетический обмен у бактерий. Конъюгация: сущность, этапы, значение. Типы штаммов-доноров: F+; Hfr; F`: свойства донорных клеток и особенности взаимодействия с реципиентом.
Конъюгация- форма обмена генетическим материалом между бактериями при их непосредственном клеточном контакте. Этот процесс контролируется F-плазмидами, а также другими конъюгативными плазмидами. При конъюгации донорами являются “мужские” клетки, содержащие F-плазмиды, а реципиентами являются “женские” F-минус клетки, у которых плазмида отсутствует.
Бактериальные штаммы, в клетках которых F-фактор интегрирован в хромосомы носят название Hfr-штаммы.
F`-свободная плазмида,несущая несколько бактериальных генов.
Типы скрещиваний: F+ x F-; Hfr x F-;F` x F-
Клетки-доноры возможно отличить от реципиентных клеток по наличию F-пилей, дополнительного поверхностного антигена, по чувствительности к некоторым РНК-бактериофагам, а также по ряду физико-химических свойств.
№10 Генетические рекомбинации у бактерий. Типы рекомбинации по молекулярному механизму. Способы переноса генетического материала из клетки в клетку. Трансдукция: сущность, типы трансдукции, значение.
Генетические рекомбинации по молекулярному механизму делятся на гомологичную, сайт-специфическую и незаконную рекомбинацию.
Трансдукция- процесс переноса генетического материала от бактерии-донора к бактерии-рецепиенту с помощью бактериофага. Трансдукция осуществляется дефектными бактериофагами, которые не способны к самостоятельной репродукции в клетке и для формирования фагового потомства нуждаются в присутствии родственного фага.
Типы трансдукции: неспецифическая (общая) и специфическая (локализованная) и абортивная.
Спомощью трансдукции происходит перенос бактериальных генов, плазмид и транспозонов, что используется в генной инженерии.
№11 Микробиологические основы генной инженерии и биотехнологии- клонирующий вектор, эндонуклеазы рестрикции, ДНК-лигазы, клонирование ДНК. Применение генной инженерии в микробиологической биотехнологии: создание диагностических, лечебных и профилактических препаратов.
Генная инженерия- раздел молекулярной генетики, представляющий собой совокупность методов и технологий для создания in vitro рекомбинантных молекул ДНК или РНК и способов их переноса. В результате клетки, получившие чужеродные гены, приобретают способность синтезировать белки, которые они ранее не синтезировали.
Рекомбинантные молекулы содержат два компонента- вектор(переносчик) и клонируемую “чужеродную” ДНК.
Векторами являются циркулярно замкнутные молекулы ДНК- плазмиды, умеренные бактериофаги или вирусы животных, иногда космиды( плазмиды с липкими концами, cos-сайтами ДНК бактериофага лямбда). Они должны обладать рядом свойств, в частности:
- самостоятельно реплицироваться
- нести в своем составе участки рестрикции
- содержать маркеры фенотипа
Клонируемые молекулы ДНК- это фрагменты ДНК, имеющие определённые гены, кодирующие синтез нужного вещества. Их получают экстракцией натриевой ДНК, с помощью фермента обратной транскриптазы на молекуле и-РНК и синтезов генов химическим способом.
Рекомбинантную молекулу ДНК можно получить с помощью фермента рестриктазы. Обрабатываются ДНК вектора и изолированные ДНК эндонуклеазой рестрикции,которая расщепляет взятые молекулы ДНК в строго определенном месте с образованием однонитчатых, комплементарных друг друг концов. Далее фермент полинуклеотидлигаза сшивает две разные линейные молекулы ДНК в одну рекомбинантную ДНК.
Генная инженерия применяется для переноса генной информации из одной клетки в другую,преодолевая даже межвидовые барьеры; для создания микроорганизмов-продуцентов ферментов, гормонов, вакцин, антигенных препаратов и т.д.
№12 Молекулярно-генетические методы диагностики. Амплификационные технологии: конвенциональная ПЦР, ПЦР в реальном времени. Некоторые разновидности ПЦР: ПЦР с обратной транскрипцией, мультиплексная ПЦР и др. Области применения генетических технологий.
Молекулярно-генетические методы- методы, позволяющие в генетических материалах обнаруживать фрагменты геномов.
ПЦР- метод получения большого количества специфических нуклеотидных последовательностей ДНК in vitro. Амплификация-умножение определенных генов или их фрагментов с определенной нуклеотидной последовательностью ДНК. В результате реакции исследуемый генетический материал накапливается в значительном количестве и может быть легко выявлен и индентифицирован.
Этапы:
Денатурация- разъединение определяемой двухцепочечной ДНК на две изолированные цепочки при нагревании до 90-95 градусов по Цельсию в течении 0.5-1 минут.
Отжиг- восстановление двухцепочечной структуры определяемой ДНК в области присоединения комплементарного праймера при температуре 40-60 0.5 минут.
Удлинение (элонгация)- достройка каждой цепи определяемой ДНК до исходного двухцепочечного состояния с помощью термостабильной ДНК- полимеразы- проводится при температуре 70-75 в течение 2-5 минут.
Конвенциональная ПЦР
В данном варианте постановки ПЦР реакция идет заранее выбранное число циклов (30-40), после чего анализируется, произошло ли накопление двуцепочечных молекул ДНК в реакционной смеси.
ПЦР в реальном времени
В данном варианте постановки ПЦР количество продукта ПЦР в реакционной смеси регистрируется постоянно в ходе протекания реакции. Это позволяет построить кривую протекания реакции и, исходя из неё, рассчитать количество искомых молекул ДНК в образцах.
Цифровая количественная ПЦР
Новый, дорогостоящий и пока малораспространенный вариант ПЦР, позволяющий более точно определять количество ДНК в образце.В данном варианте реакционная смесь, содержащая флуоресцентный краситель, разбивается на огромное число микроскопических объемов (например, капелек в эмульсии). После протекания ПЦР анализируется, в какой доле капелек реакция оказалась положительной и, соответственно, наблюдается флуоресценция. Эта доля будет пропорциональна числу искомых молекул ДНК в образце.
ПЦР с обратной транскрипцией
В данном случае перед тем или иным вариантом ПЦР производится реакция обратной транскрипции (РНК в ДНК) с использованием фермента ревертазы. Таким образом, этот метод позволяет проводить качественное или количественное обнаружение молекул РНК. Это может использоваться для детекции РНК-содержащих вирусов или определения уровня транскрипции (количества мРНК) того или иного гена.
№13 Молекулярно-генетические методы диагностики. Гибридизационный анализ нуклеиновых кислот, секвенирование ДНК. Области применения генетических технологий.
Секвенирование биополимеров (белков и нуклеиновых кислот — ДНК и РНК) — определение их аминокислотной или нуклеотиднойпоследовательности (от лат. sequentum — последовательность). В результате секвенирования получают формальное описание первичной структуры линейной макромолекулы в виде последовательности мономеров в текстовом виде. Размеры секвенируемых участков ДНК обычно не превышают 100 пар нуклеотидов (next-generation sequencing) и 1000 пар нуклеотидов при секвенировании по Сенгеру. В результате секвенирования перекрывающихся участков ДНК, получают последовательности участков генов, целых генов, тотальной мРНК и даже полных геномов организмов[1][2].
Для секвенирования применяют методы Эдмана, Сэнгера и другие; в настоящее время для секвенирования генов обычно применяют метод Сэнгера с дидезоксинуклеозидтрифосфатами (ddNTP). Обычно до начала секвенирования производят амплификацию участка ДНК, последовательность которого требуется определить, при помощи ПЦР.
Микрофлора тела человека