fiziologia-metodichka (практикум)
.pdfа) Осмотический гемолиз. Если поместить эритроциты человека в изотонический раствор NaCl (0,9%), между эритроцитами и солевым раствором устанавливается динамическое равновесие – количество воды, поступающей в эритроциты и выходящей из них, одинаково. При этом размер эритроцитов не изменяется. В растворах более высокой концентрации NaCl (гипертонические р- ры) по законам осмоса вода из эритроцитов уходит в раствор, в результате чего эритроциты сморщиваются. В растворах с концентрацией меньше 0,9% NaCl (гипотонические р-ры) вода входит в эритроциты, в результате чего они набухают, увеличиваются в размерах. Чем ниже концентрация гипотонического раствора, тем больше воды входит в эритроцит, тем больше он увеличивается в размере и при определенной степени набухания оболочка эритроцитов не выдерживает растяжения и разрушается. Содержимое эритроцитов (гемоглобин) переходит в раствор, окрашивая его в розовый цвет. Разрушение эритроцитов называют гемолизом. В данном случае гемолиз является осмотическим.
б) Механический гемолиз – разрушение эритроцитов под влиянием механических воздействий.. В пробирку с раствором 0,9% NaCl добавить 2 капли крови. Насыпать в пробирку битого стекла, интенсивно встряхивать 2-3 минуты. Оставить пробирку в штативе на 1 час.
в) Химический гемолиз – разрушение эритроцитов под влиянием химических воздействий на его оболочку. В пробирку с раствором HCl добавить 2-3 капли крови. Для сравнения добавить 2-3 капли крови в пробирку с раствором 0,9 % NaCl. Оставить пробирки в штативе на 1 час.
Указания к оформлению протокола - 1. Опишите полученные результаты.
2.Объясните механизмы осмотического, механического, химического видов гемолиза?
РАБОТА 3. Уровень освоения – знание. Исследование буферных свойств крови.
Результат – получение доказательств большей способности буферных систем плазмы поддерживать рН при поступлении в нее кислот в сравнении со способностью поддерживать рН при поступлении щелочей.
Для исследования буферных свойств крови необходимы 2 стаканчика. Наливают в первый 5 мл сыворотки крови, разведенной в 50 раз, во второй – 5 мл воды. Прибавляют в оба стаканчика по капле метилоранжа и титруют 0,1N раствором HCl до неисчезающего при взбалтывании красного окрашивания. Титрование лучше начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами и служит для контроля. Затем берут еще 2 стаканчика. В первый наливают 5 мл сыворотки крови, во второй – 5 мл воды. Прибавляют в каждый стаканчик по капле фенолфталеина и титруют 0,1 N раствором NaOH до неисчезающего фиолетового окрашивания. Количество кислоты и щелочи, затраченных на титрование, определяют в каплях. При оценке результатов данного опыта необходимо учитывать, что сыворотка разведена в 50 раз, поэтому итоговые результаты титрования (количество капель HCl и NaOH) необходимо умножить на 50.
Результаты титрования в норме –1 капля при титровании воды NaOH, 1 капля при титровании сыворотки NaOH; 1 капля при титровании воды HCl, 7 капель – при титровании HCl.
Указания к оформлению протокола – 1.Сравните буферные свойства сыворотки по способности к нейтрализации кислот и щелочей, Сделайте выводы.
31
2. Напишите химические уравнения, иллюстрирующие участие карбонатного буфера плазмы
в реакциях нейтрализации: а) кислоты, б) щелочи.
Работу выполнил – |
Дата – |
10.ТЕМА-8: Физиология эритроцита. ОРЭ (осмотическая резистентность эритроцитов), СОЭ, количество эритроцитов и их функции
Вопросы к занятию
Какие особенности формы эритроцитов обеспечивают их большую поверхность? Какой заряд имеет наружная поверхность мембраны эритроцитов? Чем отличается проницаемость мембраны эритроцита от мембран других клеток организма? Что происходит при помещении эритроцитов в гипотонические растворы, в гипертонические растворы? Что такое СОЭ? Как влияют на СОЭ альбумины, глобулины? Какова в норме величина СОЭ у женщин, у мужчин? Как и почему изменяется СОЭ при некоторых патологических процессах? Что понимают под агрегацией эритроцитов? Чем опасна агрегация эритроцитов? Какова продолжительность жизни эритроцита? Какое соединение регулирует сродство гемоглобина к кислороду?
Рекомендуемая литература
Лечфак - Физиология человека/ Под ред. В. М. Смирнова, М: Медицина. – 2001. – С. 209–212. Педфак - Нормальная физиология / Под ред. В. М. Смирнова, М: Медицина. – 2010. – С. 171–174.
Практикум
РАБОТА 1. Уровень освоения – знание. Определение границ осмотической стойкости
эритроцитов.
Результат - параметризация эритроцитов по показателям минимальной и максимальной осмотической устойчивости эритроцитов.
В штатив поместите 5 пробирок с растворами хлористого натрия разной концентрации - 0,9%, 0,7%, 0,5%, 0,4%, 0,3%. В каждую из пробирок добавьте по 2 капли крови. Пробирки встряхните и оставьте на 1 час. В гипотонических растворах эритроциты набухают и разрушаются (осмотический гемолиз). Однако не все эритроциты разрушаются при одной и той же степени набухания. Есть эритроциты, оболочка которых выдерживает большее растяжение, есть эритроциты, оболочка которых выдерживает меньшее растяжение. Поэтому различают минимальную и максимальную осмотическую устойчивость эритроцитов. Минимальная осмотическая устойчивость эритроцитов определяется той наибольшей концентрацией р-ра хлористого натрия, при которой разрушаются самые неустойчивые к растяжению эритроциты, что приводит к частичному гемолиза. Признаки частичного гемолиза: наличие осадка неразрушенных эритроцитов и окрашенный слой жидкости над осадком. Максимальная осмотическая устойчивость определяется той наибольшей концентрацией раствора хлористого натрия, при которой разрушаются все эритроциты – полный гемолиз. Признаком полного гемолиза является "лаковая кровь" – содержимое пробирки абсолютно прозрачно, окрашено в розовый цвет.
Указания к оформлению протокола – 1. Зарисуйте опытные пробирки в стандартной последовательности, укажите, где произошел
частичный гемолиз, где – полный гемолиз.
32
2.Охарактеризуйте признаки частичного и полного видов гемолиза –
3.Как можно определить минимальную и максимальную осмотическую устойчивость (резистентность) эритроцитов?
РАБОТА 2. Уровень освоения – знание. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
Смотри «Руководство» – работа 3.7. С. 84.
Результат – определение скорости оседания эритроцитов в мм/ч
Указания к оформлению протокола - 1.Зарисуйте капилляр для определения СОЭ с метками –
2.Для чего в исследовании СОЭ применяют цитрат натрия –
3.Отметьте результат СОЭ в опыте –
4.Чему в норме равна величина СОЭ для мужчин и женщин?
РАБОТА 3. Уровень освоения – знание. Подсчет эритроцитов. Смотри «Руководство» –
работа 3.2. С. 77.
Результат - определение числа эритроцитов в единице объема крови.
Указания к оформлению протокола -
1.Чем разводится кровь при подсчете эритроцитов -
2.Рассчитайте количество эритроцитов в исследуемой крови. Сделайте вывод о соответствии полученных результатов с нормой –
Эритроциты на фоне сетки камеры Горяева. При подсчете – учитывайте рекомендации процедуры счета, изложенные в «Руководстве». Количественные показатели по каждому «малому» квадрату, а также итоговый результат – внесите в протокол.
33
Работу выполнил – |
Дата – |
11.ТЕМА-9: Функции гемоглобина, регуляция эритропоэза, физиология лейкоцитов. Регуляция лейкопоэза
Вопросы к занятию
Какие функции реализует гемоглобин? Сколько содержится гемоглобина в крови у мужчин, у женщин? Что такое нормохромный эритроцит? Назовите известные Вам соединения гемоглобина, охарактеризуйте их? Что такое миоглобин? Что выражает кислородная емкость крови? Где синтезируются эритропоэтины? Каковы механизмы стимуляции образования эритропоэтинов в условиях гипоксии? Что такое внешний и внутренний факторы кроветворения? Сколько лейкоцитов содержится в 1 л крови? На какие группы делятся лейкоциты? Каковы функции нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов, лимфоцитов? Какова продолжительность жизни разных видов лейкоцитов? Что такое лейкопения, лейкоцитоз? Что такое индекс регенерации, чему он равен в норме? Каковы причины сдвигов влево и вправо в лейкоцитарной формуле? Назовите виды иммунитета? Что такое фагоцитоз? Что обозначает термин лейкопоэз? Что такое миелопоэз? Назовите специфические регуляторы миелопоэза? Какие гормоны оказывают влияние на миелопоэз? Каковы важнейшие регуляторы лимфопоэза? Каков механизм влияния глюкокортикоидов на лимфопоэз?
Рекомендуемая литература
Лечфак - Физиология человека/ Под ред. В. М. Смирнова, М: Медицина. – 2001. – С. 213–224. Педфак - Нормальная физиология / Под ред. В. М. Смирнова, М: Медицина. – 2010. – С. 175–180.
Практикум
РАБОТА 1. Уровень освоения – знание. Определение количества гемоглобина по способу
Сали.
Результат - определение абсолютного содержания гемоглобина в исследуемой крови.
Содержание гемоглобина в крови у здоровых женщин составляет 120-140 г/л, а у мужчин - 130160 г/л. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 N раствор HCl до кольцевой метки. Специальным капилляром набирают 0,02 мл крови из пальца. Оботрите кончик капилляра ватой. Выдуйте кровь на дно средней пробирки. Не вынимая капилляра, промойте его кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешайте и оставьте в штатив на 5-10 мин
34
для превращения гемоглобина в хлорид гематина. Затем к содержимому опытной пробирки добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет раствора не сравняется с цветом стандарта в двух крайних пробирках. Раствор перемешивают. Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска исследуемого раствора, показывает содержание гемоглобина в крови в граммпроцентах, выражающих количество граммов гемоглобина в 100 мл крови. Чтобы перейти к содержанию гемоглобина в 1 л крови, найденный результат необходимо умножить на 10. Например, исследуемая кровь содержит - 15,5 г% гемоглобина, следовательно, в 1 л исследуемой крови содержится 155 г гемоглобина. Полученные данные выражают абсолютное содержание гемоглобина в исследуемой крови. Идеальное содержание гемоглобина в крови составляет 167 г/л. Эта величина принимается за 100-процентное содержание гемоглобина в крови. В каждом случае можно вычислить величину относительного содержания гемоглобина в крови,
выражающее процентное содержание гемоглобина относительно идеального содержания - 167 г/л. Например, абсолютное содержание гемоглобина в исследуемой крови - 155 г/л, для расчета относительного содержания составляем пропорцию:
167 г/л - 100%
155 г/л - х
155 * 100 Х = -------------- = 92%
167
Указания к оформлению протокола –
Запишите данные содержания гемоглобина в исследуемой крови в абсолютном и относительном выражениях. Сравните полученный результат с нормой.
РАБОТА 2. Уровень освоения – знание. Спектры гемоглобина и оксигемоглобина.
Результат - характерные конфигурации линий поглощения спектров оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина.
Гемоглобин, оксигемоглобин обладают характерными спектрами поглощения. Чтобы оценить спектры поглощения гемоглобина, оксигемоглобина - в пробирку с дистиллированной водой добавляют несколько капель крови; пробирку устанавливают между спектроскопом и источником света. а) Содержащийся в растворе гемолизированной крови оксигемоглобин дает две полосы поглощения в желто-зеленой части спектра между фраунгоферовыми линиями Д и Е. б) Для получения восстановленного гемоглобина к раствору гемолизированной крови добавляют несколько капель восстановителя ( реактива Стокса) в смести с р-ром аммиака. Раствор в пробирке приобретает темно-вишневый цвет. При спектральном анализе обнаруживается одна широкая полоса поглощения в желто-зеленой части спектра. в) Гемоглобин легко соединяется с кислородом. Если пробирку с восстановленным гемоглобином несколько раз встряхнуть, исследуемый раствор становится красным вследствие образования оксигемоглобина. В спектре вновь появляются две полосы поглощения.
Указания к оформлению протокола -
1.Зарисуйте спектры поглощения оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина.
2.Какое значение имеет спектральный анализ крови для медицинской практики?
РАБОТА 3. Уровень освоения – умение. Расчет цветового (цветного) показателя крови.
35
Результат - нормальный ЦП 0,8–1,0.
Отношение количества гемоглобина крови (относительное содержание) к числу эритроцитов (относительное содержание) носит название цветового (цветного) показателя крови (ЦП). Этот показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином.
Hb%
ЦП = ------- (1)
Эр% Для расчета относительного содержания эритроцитов (Эр %) в формуле (1) за 100 % принимают
количество эритроцитов 5*1012/л. Показатель А (формула 2) - количество эритроцитов исследуемой крови.
Составим пропорцию – 5*1012 /л - 100%
А- Эр%
|
А * 100 |
Отсюда Эр % = |
------------ (2) |
|
5*1012 |
Подставляя значение Эр% в формулу расчета цветового показателя (формула 1) находим:
Hb% * 5*1012 ЦП.= -------------------
А * 100
В норме ЦП составляет 0,8–1,0.
Указания к оформлению протокола - Рассчитайте цветовой показатель крови. Оцените полученный результат –
Задача. Цветовой показатель равен 0,6. Что это означает –
РАБОТА 4. Уровень освоения – знание. Кристаллы гемина.
Результат - характерная форма кристаллов – ромбические палочки темно-коричневого цвета.
Получение кристаллов гемина (проба Тейхмана) является качественной реакцией на гемоглобин и используется в судебно-медицинской практике для доказательства наличия крови в исследуемых материалах. Кристаллы гемина имеют характерную форму ромбических палочек темнокоричневого цвета, которые можно наблюдать под микроскопом (готовый препарат).
Указания к оформлению протокола
1.Рассмотрите под микроскопом кристаллы гемина крови человека и зарисуйте их.
2.Какое значение имеет тест на кристаллы гемина для медицинской практики?
РАБОТА 5. Уровень освоения – умение. Подсчет лейкоцитов. Смотри «Руководство» – работа
3.8. С. 85.
Результат – количество лейкоцитов в 1 л крови.
36
Указания к оформлению протокола -
1.Во сколько раз разводится кровь для подсчета лейкоцитов –
2.Чем разводится кровь для подсчета лейкоцитов –
3.Рассчитайте количество лейкоцитов исследуемой крови. Сделайте вывод о соответствии полученных результатов с нормой –
Кровь – разведение в 20 раз. Число больших квадратов – 100
Результат –
Работу выполнил – |
Дата – |
12.ТЕМА-10: Группы крови. Резус-фактор. Свертывание крови
Вопросы к занятию В чем главное отличие сосудисто-тромбоцитарного гемостаза от коагуляционного? Охарактризуйте 1 фазу коагуляционного гемостаза. Какова роль протромбиназы в процессе свертывания? Какие факторы обеспечивают внешний механизм формирования протромбиназы? Какие факторы обеспечивают внутренний механизм образования протромбиназы? Охарактеризуйте 2 фазу коагуляционного гемостаза. Охарактеризуйте 3 фазу коагуляционного гемостаза. Какие ионы необходимы для свертывания крови? Что такое фибринолиз, его значение? Что такое антикоагулянты? Назовите "первичные" антикоагулянты. Какое влияние оказывает вегетативная нервная система на свертываемость крови? Назовите основные группы крови системы АВ0? Что такое иммунологический конфликт, когда он возникает? Назовите основное правило переливания крови? Что произойдет при переливании резус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту, чем опасно такое переливание?
Рекомендуемая литература
Лечфак -Физиология человека/ Под ред. В. М. Смирнова, М: Медицина. – 2001. – С. 224–235. Интернет-лекция «Свертывание крови. Группы крови».
Педфак - Нормальная физиология/ Под ред. В.М. Смирнова, М: Медицина.–2001.–С.180-188.
Интернет-лекция – «Свертывание крови. Группы крови».
37
Практикум
РАБОТА 1. Уровень – умение. Определение группы крови. Смотри «Руководство» – работа
3.12. С. 91.
Результат - оценка групповой принадлежности крови. .
Указания к оформлению протокола - Сделайте рисунок лабораторной пластинки с каплями стандартных сывороток и крови. Укажите,
где произошла агглютинация. Обозначьте агглютиногены эритроцитов, агглютинины сыворотки для каждой позиции и докажите, что исследуемая кровь принадлежит к определенной группе.
Задача. При добавлении крови к стандартным сывороткам агглютинация произошла во всех каплях. Определите группу крови. Вывод обоснуйте.
Задача. При добавлении крови к стандартным сывороткам агглютинация во всех каплях не произошла. Определите группу крови. Вывод обоснуйте.
РАБОТА 2. Уровень освоения – знание. Микрометод определения протромбина.
Результат – протромбиновое время в норме – 35 с, протромбиновый индекс – 80-100.
На водяную баню с температурой воды 37-38 градусов установливают часовое стекло. На него помещают по 30 мм 0,1 М раствора хлорида кальция, протромбиназы, исследуемой крови, набранных отдельными капиллярами Панченкова. Стеклянной палочкой начинают перемешивать кровь с растворами. В начале перемешивания включают секундомер. При перемешивании отмечают появление тянущихся за кончиком стеклянной палочки нитей фибрина. В момент появления первой нити останавливают секундомер. Он показывает протромбиновое время, так как в данном опыте при избытке протромбиназы свертывание зависит исключительно от содержания протромбина. Стандарт протромбинового времени при данном методе - 35 секунд. По найденному протромбиновому времени вычисляют протромбиновый индекс (ПИ) , который характеризует процесс свертывания крови.
|
протромбиновое время стандартное |
ПИ = |
----------------------------------------------------------- * 100% |
|
протромбиновое время найденное |
В норме протромбиновый индекс колеблется от 80 до 100.
Указания к оформлению протокола –
Ситуационная задача. При подготовке больного к операции обычно определяют протромбиновое время и протромбиновый индекс. С какой целью это делается –
38
РАБОТА 3. Уровень освоения – умение. Определение времени остановки стандартного кровотечения – оценка эффективности сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Смотри
«Руководство» – работа 3.9. С.86.
Результат - в норме время составляет величину порядка 3 мин.
Указания к оформлению протокола - За счет каких механизмов обеспечивается остановка кровотечения в данном опыте?
Ситуационная задача. Отсутствие в крови антигемофильных глобулинов является причиной развития гемофилии, заболевания, при котором кровь у человека теряет способность к свертыванию.
Вопрос: С каким результатом проходит настоящий тест у больного гемофилией?
РАБОТА 4. Уровень освоения – знание. Определение времени свертывания крови по Мас и Магро – оценка эффективности коагуляционного гемостаза.
Результат - норма 8-12 мин.
На часовое стекло, покрытое парафином, помещают каплю вазелинового масла. Из прокола пальца капилляром Панченкова, предварительно смоченным изнутри вазелиновым маслом, берут каплю крови и помещают ее в каплю вазелинового масла. Через каждые две минуты насасывают кровь в капилляр и выдувают еѐ в каплю вазелинового масла. Замечают время, когда насасывание крови в капилляр станет невозможным – кровь превратится в сгусток. В норме у человека при комнатной температуре время свертывания по этому методу составляет 8-12 мин.
Указания к оформлению протокола - За счет каких механизмов происходит свертывание крови в данном опыте?
Ситуационная задача. Отсутствие в крови антигемофильных глобулинов является причиной развития гемофилии, заболевания, при котором кровь у человека теряет способность к свертыванию.
Вопрос: С каким результатом проходит настоящий тест у больного гемофилией?
Проблема свертывания крови в хирургии. Врач-хирург в своей практике постоянно сталкивается с необходимостью оценки состояния системы гемостаза у пациентов. Кровотечение, возникающее в ходе операции, обычно прекращается через несколько минут, но может продолжаться и более длительное время. Причины, вызывающие кровоточивость, разделяют на 2 группы: 1) болезни сосудов, 2) нарушения системы свертывания крови. Перед проведением операций врач обязан выяснить, не было ли у больного длительного кровотечения при операциях и случайных ранениях. При склонности к кровотечению следует провести специальные исследования состояния
гемостаза и проконсультировать больного у врача-гематолога. |
|
Больных с повышенной кровоточивостью нужно специально готовить к операции. |
При этом |
показано применение средств, повышающих свертывание крови: аскорбиновой |
кислоты, |
39 |
|
укрепляющей сосудистую стенку, викасола (синтетический заменитель витамина К, необходим для синтеза в печени протромбина и ряда других факторов свертывания крови), растворов хлорида кальция (ионы кальция участвуют во всех фазах свертывания крови), переливание одногруппной крови.
РАБОТА 5. Уровень – знание. Влияние температуры на свертывание крови.
Для работы необходимы – цитратная кровь, водяная баня, 1% раствора хлорида кальция, секундомер.
Результат - быстрее всего кровь свертывается при температуре 37 градусов.
В 4 пробирки наливают по 2 мл донорской цитратной крови. Помещают первую пробирку в лед (0 градусов), вторую в водяную баню с температурой 37 градусов, третью - в водяную баню с температурой 56 градусов, четвертую оставляют в штативе при комнатной температуре (17-18 градусов). Через 5 мин прибавляют в каждую пробирку по 4 капли 1% раствора хлорида кальция, замечают время. Через каждые 2 мин наклоняют пробирки для определения момента образование сгустка (тромба).
Указания к оформлению протокола - 1. Для чего в настоящем опыте в пробирки с донорской кровью добавляют раствор хлорида кальция?
2.При какой температуре время свертывания будет минимальным, почему?
3.Как и почему будет изменяться время свертывания крови при снижении температуры от уровня в 37 градусов?
4.Как и почему будет изменяться время свертывания крови при повышении температуры от уровня в 37 градусов?
5.Как изменится время свертывания крови при температуре 56 градусов?
Ситуационная задача – Нарисуйте примерный график, выражающий зависимость времени свертывания крови от температуры (см. график)
Работу выполнил – |
Дата – |
40