Вопросы для подготовки

1. Общее представление о цитокинах. Их основные группы. Цитокиновая сеть и принципы ее функционирования.

2. Провоспалительные цитокины (ИЛ-1, ФНО-α, ИЛ-6 и др.). Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

3. Противовоспалительные цитокины. Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

4. Интерфероны, классификация, структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

5. Цитокиновые рецепторы. Сигнальные пути при действии на клетку цитокинов.

6. Апоптоз, его виды. Механизмы запуска апоптоза, роль цитокинов семейства ФНО и белков Вcl-2.

7. Каспазы, особенности строения и роль в апоптозе.

8. Использование цитокинов в клинике. Препараты интреферонов Iтипа и интерфероногены. Примеры.

Задания для подготовки

Заполнить таблицу «Функции цитокинов»:

Распределить следующие цитокины по функциональному назначению и роли в иммунном ответе: IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, CXCL-8, TNF-α,β,IFN-α,IFN-γ,TGF-β.

Активность цитокинов	Представители
Провоспалительные
Противовоспалительные
Активация фагоцитов
Подавление активности фагоцитов
Активация В-лимфоцитов
Активация Т-лимфоцитов
Подавление иммунного ответа

Практическая работа

Р а б о т а №1

Цель: Ознакомиться с методами определения гуморальных показателей естественной резистентности: лизоцима, С3 компонента комплемента и бактерицидной активности сыворотки.

Задача. Обследуемый А, 18 лет, с 7 лет находящийся на диспансерном учете в группе ЧБД («часто болеющие дети»), был направлен в клинико-иммунологическую лабораторию для оценки состояния факторов естественной резистентности (обследование проведено в весеннее время).

1. Определите уровень лизоцима, С3 компонента комплемента и бактерицидной активности сыворотки (БАС).

2. Сравните полученные данные с нормативными значениями, оцените результат и сделайте заключение о состоянии естественной резистентности обследуемого А.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

1. Определение количества лизоцима в сыворотке методом диффузии в агаре.

Микробную взвесь тест-культуры ацетонированного микрококка (M. luteus) вносят в расплавленный и охлажденный до 45°С агар. На 60 мл агара берут 40 мл (сухой вес) бактерий, суспензированных в 4 мл солевого раствора. Агар разливают в чашки Петри и после застывания делают в агаре лунки, в которые вносят исследуемую сыворотку крови. В контрольные лунки вносят стандартный лизоцим куриного белка в концентрации от 0,5 до 8 мкг/мл. Чашки инкубируют в течение суток при 37°С.

Учет результатов проводят путем замера зон лизиса микрококка вокруг лунок с внесенными образцами проб сывороток. Количество лизоцима рассчитывают по специальной таблице, построенной на основании литического действия различных концентраций стандартного лизоцима в отношении тест-культур микрококка.

2. Определение бактерицидной активности сыворотки (бас)

Исследование основано на классическом методе Бюхнера, позволяющем судить о бактерицидной активности сыворотки по количеству колоний тест-культуры, выросшей при высеве до и после инкубации с исследуемой сывороткой. К исследуемой сыворотке в объеме 1 мл добавляют 0,1 мл 1 млрд взвеси суточной культуры кишечной палочки. Затем делают два посева на чашки Петри с питательной средой. Один посев – сразу же после смешивания культуры с сывороткой (контроль), а второй – после инкубации 30 мин при 37°С (опыт). Посевы инкубируют сутки в термостате и затем подсчитывают число выросших колоний в опытной и контрольной чашках. По формуле определяют БАС:

(А – А₁ )х 100%/А,

где А₁ – число колоний в опытной чашке,

А – число колоний в контрольной чашке.