Окраска препаратов

Способность микроорганизмов к окрашиванию различными красителями определяет их тинкториальные свойства.

Методы окраски микробов разнообразны и многочисленны. В бактериологической работе наиболее употребительны приводи­мые ниже рецепты красок и способы окраски препаратов, кото­рые в основном можно разделить на две группы: ориентировоч­ные простые окраски и окраски дифференциальные, выявляющие химические и структурные особенности бактерий.

Виды красителей

Красители, применяемые для бактериологических исследова­ний, относятся к группе так называемых анилиновых. Они раз­деляются на «основные» и «кислые». Термины «кислые» и «ос­новные» только определяют сродство краски к определенной части клетки. Основными красками хорошо окрашиваются ядерный хроматин и микробы. Кислые краски окрашивают микробов сла­бее, при окраске же тканей они окрашивают протоплазму кле­ток. Наиболее употребительны следующие краски: метиленовый синий, тионин (синие краски), основной фуксин, сафранин и эозин (красные), бисмарк-браун, или везувин (коричневая), метилгрюн (зеленая), метилвиолет, генцианвиолет, кристаллвио­лет (фиолетовые). Из них только эозин – кислая краска; она употребляется для некоторых специальных целей. Все эти краски продаются в виде аморфных или кристаллических порош­ков, из которых готовят красящие растворы.

Приготовление красящих растворов. Исходным материалом почти для всех необходимых рабочих красок являются насыщен­ные спиртовые растворы, которые следует иметь в запасе и со­хранять в склянках с притертыми пробками. Насыщенные спирто­вые растворы готовят следующим образом: 10 г сухой краски насыпают во флакон с притертой пробкой, наливают 100 мл 96º спирта (ректификата) и дают настояться в течение нескольких дней, каждый день, взбалтывая раствор. Из таких насыщенных растворов готовят спиртово-водные растворы, пригодные для окраски микробов. Наиболее часто употребляются следующие растворы:

Карболовый фуксин (фуксин Циля)

10 мл насыщенного спиртового раствора фуксина

90 мл 5% карболовой кислоты

Разведенный фуксин

10 мл карболового фуксина

90 мл дистиллированной воды

Щелочной метиленовый синий

30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего

100 мл дистиллированной воды

1мл 1% раствора щелочи

Карболовый генцианвиолет

10 мл насыщенного спиртового раствора генцианвиолета

90 мг 5% карболовой кислоты.

Растворы генцианвиолета дают осадок при окрашивании. Вместо генцианвиолета можно пользоваться насыщенными спирто­выми растворами метиленвиолета или кристаллвиолета. Растворы карболовой кислоты можно брать 1%, а не 5%. Кроме того, для окраски по Граму можно пользоваться 0,25% водным раствором метиленвиолета или кристаллвиолета без карболовой кислоты. Раствор стоек и осадка не дает.

По методу Синева вместо раствора генцианвиолета приме­няют кусочки фильтровальной бумаги, предварительно пропитан­ной спиртовым раствором краски и затем высушенные. Для этого листы фильтровальной бумаги погружают на 1-2 минуты в 1-2% раствор краски в 96º спирте, бумагу высушивают и разрезают на кусочки величиной 24 см. Такие бу­мажки сохраняются в банках с притертой пробкой неограничен­ное время.