Определение микробиологической чистоты лекарственного сырья и готовых лекарственных средств, не обладающих антимикробными свойствами

Испытание на микробиологическую чистоту осуществляется методом прямого посева (см.схему).

Подготовка образцов для анализа

От каждой серии лекарственного препарата (сырья) отбирают среднюю пробу не менее, чем 50 г (мл), состоящую из 10 равных разовых проб, взятых из 10 разных упаковок. Для проведения одного анализа используют 10 г (мл) образца, которые разводят стерильным буферным раствором рН 7,0 до конечного объема 100 мл. Образцы готовят к испытанию в виде раствора, суспензии или эмульсии.

Твердые лекарственные формы (порошки, таблетки, драже и др.) и сырье, которые трудно растворяются, вначале измельчают, затем суспендируют в буферном растворе. Мягкие (мази, пасты, свечи, масла, эмульсии) готовят в виде гомогенной эмульсии, для чего к препарату (10 г) добавляют фосфатный буферный раствор и эмульгатор твин-80 (2,5 %). Для получения гомогенного состояния добавляют стеклянные бусы, осуществляют механическое встряхивание и, в случае необходимости, эмульсию нагревают до температуры не более 45С. К мягким лекарственным формам, изготовленным на водорастворимой основе, эмульгатор не добавляют.

Питательные среды

Используют питательные среды, рекомендуемые Фармакопеей: МПА с 1% глюкозой (среда № 1) – для выращивания бактерий; агар Сабуро (среда № 2 с антибиотиками бензилпенициллином или тетрациклином из расчета 100 мг на 1000 мл среды) – для выращивания грибов; среда № 3 – среда обогащения для энтеробактерий ; агар Эндо (среда № 4) и висмут-сульфитный агар (среда № 5) – для дифференциации представителей семейства энтеробактерий; среда с феноловым красным (среда № 6) – для определения ферментации глюкозы; среда № 7 – для определения восстановления нитратов в нитриты; среда № 8 – среда обогащения для P.aeruginosa и S. aureus; среда № 9 – для выявления пигмента P.aeruginosa; солевой агар с маннитом (среда № 10) – для идентификации S. aureus.

Определение общего числа бактерий

1 мл подготовленного вышеуказанным способом образца лекарственного средства, разведенного 1:10, вносят в виде раствора (суспензии, эмульсии) в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до температуры 45-50С среды № 1. Быстро перемешивают и вносят в каждую из двух чашек Петри, в которых содержится 15 мл этой же среды, предварительно залитой и застывшей. Равномерно распределяют верхний слой и после застывания инкубируют в течение 5 суток при температуре 32,52,5С. Затем подсчитывают число колоний на двух чашках, находят среднее арифметическое и, умножая на показатель разведения (в данном случае 10), вычисляют число бактерий в 1 г (мл) исследуемого образца.

Следует учитывать только те чашки, на которых выросло менее 300 колоний. Если число колоний больше, осуществляют ряд последовательных разведений (1:100; 1:1000 и т. д.), выбирая для посева наиболее подходящее.

В случае отсутствия роста колоний в разведении 1:10 отмечают, что в 1 г (мл) лекарственного средства менее 10 бактерий.

Наиболее достоверные результаты дают чашки с числом колоний от 30 до 300.