Научные стремления 2011-1

3. Шлык, Н.И. Сердечный ритм и тип регуляции у детей, подростков и спортсменов:/ Н.И. Шлык – Ижевск: Изд-во «Удмуртский университет», 2009. – 255с.

A.N. Starovoitov, U.N. Tuimanova

EVALUATION OF THE FUNCTIONAL STATE SPORTSWOMEN 11-13 YEARS, ENGAGED IN ARTISTIK GYMNASTIKS BEFORE AND AFTER TRAINING CLASSES

Gomel State Medical University, Gomel

Summary

The questions assess the functional status of athletes before and after training, the level of fitness athlete. Assessment of heart rate variability (HRV) provides an approach to scientific prediction of physical abilities of athletes, address issues of selection for sports activities, more efficient training regime to build and maintain control of the functional state of athletes.

531

УДК 579.6. 579.2. 533.9

Е.В. Сысолятина1, А.Ф. Варфоломеев1 , М.Ю. Чернуха1, А.Я. Мухачев1 , М.М. Васильев2, И.А. Шагинян1, О.Ф. Петров2, Б.С. Народицкий1,

А.Л. Гинцбург1 , В.Е. Фортов2, G. Morfill3, С.А. Ермолаева1

ИЗУЧЕНИЕ БАКТЕРИЦИДНЫХ СВОЙСТВ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ АРГОНОВОЙ ПЛАЗМЫ IN VITRO И IN

VIVO

1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи» Министерства здравоохранения и

социального развития Российской Федерации, Москва 2Объединенный институт высоких температур Российской академии наук, Москва

Актуальность. Применение низкотемпературной плазмы (НТП) в медицине является недавно возникшим, но быстроразвивающимся направлением применения высоких технологий в медицине. НТП обладает рядом преимуществ перед другими методами обеззараживания и стерилизации. К ним относятся (I) отсутствие высокотоксических веществ пролонгированного действия; (II) меньшая вероятность развития спонтанной устойчивости к НТП у микроорганизмов-мишеней как результат множественной природы токсического воздействия; (III) относительно низкая стоимость источников НТП; (IV) независимость применения как обеззараживающего агента от рельефа обрабатываемой поверхности и безболезненность применения. Дальнейшие исследования и контроль за параметрами плазменного потока необходимы для

повышения эффективности и для оценки применимости НТП в практике здравоохранения.

Целью данной работы была оценка бактерицидного потенциала низкотемпературной аргоновой плазмы (НТП) в отношении патогенных бактерий in vitro, в составе биопленок и in vivo на поверхности ран.

Материалы и методы. Для этого были отобраны наиболее распространенные возбудители госпитальных и раневых инфекций

(Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Enterococcus faescium). Все эксперименты были выполнены на приборе MicroPlaSter β, созданном для обработки раневых поверхностей (рисунок 1). Он работает в режиме аргоновой плазмы и плацебо, при котором производится поток неионизированного аргона. Факел имеет диаметр 3,5см и длину около 4 см, расстояние от поверхности образца до источника плазмы составляло 2±0,2 см. На этом расстоянии температура факела 35±2°С.

532

Первоначально чувствительность возбудителей к НТП была определена in vitro на агаризованной питательной среде. Чувствительность всех протестированных грамотрицательных патогенов – P.aeruginosa, E.coli, B.cenocepacia была высокой: после 2-х и 5-тиминутной обработки наблюдалась 99,9 % и 100% гибель 105 колониеобразующих единиц (КОЕ) соответственно. Однако чувствительность грамположительных бактерий была не только видо-, но и штаммо-специфичной. Клинический штамм S. aureus GIM78 был столь же чувствителен, как грамотрицательные бактерии. Клинический штамм S. pyogenes GIM861 и штамм 6538 S.aureus из типовой коллекции обладали наиболее низкой чувствительностью. После 5-тиминутной обработки выживали

17,5% и 10,0% S. pyogenes GIM861 и S.aureus 6538, соответственно. Около 5%

S. pyogenes формировали колонии и после 10 мин воздействия плазмы. Неионизированный аргон не обладал бактерицидным эффектом.

Известно, что основной формой существования бактерий на поверхности медицинских изделий и оборудования, а также частой причиной развития хроническиинфекций являются бактериальные биопленки. Это многослойные образования, включающие сообщество бактерий, укрытых экзополисахаридным матриксом, которые формируются на границах раздела фаз. Бактерии в биопленках более устойчивы к антибиотикам, окислительному стрессу и другим неблагоприятным факторам, чем планктонные бактерии. Для исследования устойчивости P.aeruginosa РА103 в биопленках было произведено окрашивание образцов красителем Live/Dead с последующей оценкой методом световой микроскопии. Мертвые (окрашенные в красный) бактерии превалировали в биопленках, обработанных НТП, в то время, как в контроле было больше живых (окрашенные в зеленый) бактерий (рисунок 2).

Рисунок 2 - Слева – биопленка, сформированная P.aeruginosa, до обработки НТП, справа – после 5-тиминутной обработки

Для сравнения эффективности воздействия НТП на бактерии in vitro и in vivo была использована модель инфицированных ран крыс. Свежие раны инокулировали смесью бактериальной суспензии S.aureus GIM78 (108 КОЕ) и P.aeruginosa Pa103 (108 КОЕ) и после появления признаков острой инфекции проводили обработку раневой поверхности НТП. Бактерицидный эффект НТП оценивали по процентному отношению выживших КОЕ среди специфических патогенов. После 5 мин воздействия среднее количество выживших составляло

533

около 100%, что сопоставимо с плацебо. Через 10 мин обработки среднее отношение выживших к начальному количеству составляло 0,54% для P.aeruginosa РА103 и 2,8% для S.aureus Sa78 (р<0.05). На 3 день ежедневного курса обработки НТП у животных наблюдалась полная элиминация P.aeruginosa, в то время, как в контрольной группе это произошло на 2 дня позже. Однако для S.aureus подобного эффекта не удалось добиться и после пятидневного курса обработки НТП, а одиночные бактерии обнаруживались и на 8 день после начала лечения.

Приемлемый бактерицидный эффект в отношении планктонных клеток, биопленок и сообществ, населяющих раны, был достигнут после 2, 5 и 10 мин обработки, соответственно. Более слабый бактерицидный эффект НТП in vivo может быть связан с глубоким расположением бактерий внутри ран, формированием биопленок и специфическим составом раневой жидкости.

Выводы. Таким образом, полученные результаты демонстрируют высокий потенциал НТП в элиминации патогенных бактерий, как in vitro, так и in vivo. Хотя возможность использования НТП в лечении хронических ран требует дальнейшего изучения, комфортная температура, сравнительно большая площадь экспозиции, бактерицидное действие в отношении широкого спектра микроорганизмов (в том числе с множественной антибиотикорезистентностью) делают НТП перспективным методом терапии инфицированных ран и стерилизации поверхностей.

E.V. Sysolyatina 1, A.F.Varfolomeev 1, M.Yu.Chernukha 1, A.Ya. Mukhachev 1 , M.M. Vasiliev 2, I.A.Shaginyan 1, O.F.Petrov 2 , B.S.Naroditskii 1, A.L.Gintsburg 1, V.E.Fortov 2 ,

G.Morfill 3, S.A. Ermolaeva 1

THE EVALUATION OF BACTERICIDAL EFFECT OF NON-THERMAL ARGON PLASMA IN VITRO AND IN VIVO

1Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Department of Health Care and Social Development of Russian Federation, Moscow

2Joint Institute of High Temperature, Russian Academy of Science, Moscow 3 Max-Plank Institute for Extraterrestrial Physics, Germany, Munich

Summary

The purpose of this study was to test the bactericidal effect against pathogenic bacteria in different biological models. Overall, Gram-negative bacteria were more susceptible to plasma treatment than Gram-positive bacteria. For the Gram-negative bacteria Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cenocepacia and Escherichia coli, there were no survivors among the initial 105 c.f.u. after a 5 min plasma treatment. Thesusceptibility of Gram-positive bacteria was speciesand strainspecific. Biofilms partly protected bacteria and it was necessary to treat for 5 min to achieve their killing. A rat model of a wound infected with P. aeruginosa and the plasma-Staphylococcus aureus strain Sa 78 was used to assess the effciency of argon plasma treatment. A 10 min treatment significantly reduced bacterial loads on the wound surface. A 5-day course of daily plasma treatments eliminated P. aeruginosa from the plasma-treated animals 2 days earlier than from the control ones. Wound healing in plasma-treated animals slowed down after the course had been completed. Overall, the results show considerable potential for non-thermal argon plasma in eliminating pathogenic bacteria from biofilms and wound surfaces.

534

УДК 616-018.46-003.217-089.843-02:616-001.46-022.1-039.22:576.321.36

С.И. Третьяк 1, Е.В. Баранов 1, А. Сахаб Хайдар 1, М.К. Недзведь 1, Е.С. Лобанок 2, И.Б. Василевич 2, Л.В. Бутько 2

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЖИРОВОЙ ТКАНИ В КОМПЛЕКСНОМ

ЛЕЧЕНИИ ДЛИТЕЛЬНО НЕ ЗАЖИВАЮЩИХ ИНФИЦИРОВАННЫХ РАН В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

1 Белорусский государственный медицинский университет 2 «Институт биофизики и клеточной инженерии» НАН РБ Минск, Беларусь

Актуальность. Лечение инфицированных ран является одной из актуальных и до конца не решенных проблем современной хирургии. Частота хирургической инфекции в общей структуре хирургических заболеваний сохраняется на уровне 35-45%, причем в структуре госпитальной инфекций в хирургической клинике нагноение ран составляет от 2-3% до 11–62,2%. Несмотря на большое количество предложенных в настоящее время методов лечения инфицированных ран, остаѐтся актуальным разработка и внедрение в клиническую практику более эффективных методик. Клеточная терапия в комплексном лечении раневых дефектов различной этиологии является новым методом, в ряде случаев превосходящим по эффективности применение современных раневых покрытий. Перспективным источником СК является жировая ткань (ЖТ), в соединительнотканных междольковых перегородках которой содержатся МСК. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) жировой ткани сами по себе обладающие хорошим пролиферативным потенциалом. Получения и малую контаминированность другим видам клеток. По данным разных авторов использование ЖТ позволяет быстрее и экономичнее получать необходимые количества клеток для трансплантации. Отсутствие правовых и юридических проблем при заборе жировой ткани, отсутствие публикации о результатах применения МСК жировой такни в комплексном лечении инфицированных ран, явилось основанием для проведения нашего экспериментального исследования.[1, 2, 3, 4, 5, 6]

Цель работы – изучить влияние аллогенных мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани на течение раневого процесса в комплексном лечении инфицированных ран.

Материалы и методы. Для проведения эксперимента нами была использована жировая ткань взрослых белых крыс линии Vistar весом 160-200 гр. В асептических условиях, производили забор жировой ткани из внебрюшинного пространства. После получения достаточные количества МСК. У экспериментальных животных выполняли моделирование округлой раны на спине. Затем дно и края раны заражались путем инъекций 24-часовые монокультуры эталонных штаммов бактерий (Staphylococcus aureus), суспендированной в 0,9% растворе натрия хлорида до 1х109 КОЕ/мл. Объем вводимой взвеси микробов составлял 2 мл. Гнойную рану получали спустя 2 суток от времени начала моделирования. Все животные были разделены на три группы в каждой группе по 5 крыс две группы контрольные а одна основная. В

535

первой контрольной группе, начиная со вторых суток от начала эксперимента, ежедневно проводили системную антибактериальную терапию цефтриаксоном. Препарат, вводили ежедневно внутримышечно в дозе 0,5 мг, начиная со 2-х суток от времени начала эксперимента и на протяжении всего период наблюдения. Во второй контрольной группы применяли антисептики (перекись водорода 3%, хлоргексидин 0,05 %, фурацелин 0,02%) и выбранную антибактериальную терапию внутримышечно. В основной группе животных лечение включало выбранную антибактериальную и клеточную терапию с применением аллогенных мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани крыс. После санации инфицированной раны антисептиками, в асептических условиях выполняли трансплантацию МСК ЖТ методом локального обкалывания в четырѐх точках вокруг раневого дефекта. Ежедневно проводились объективный осмотр раны с динамической фотосъѐмкой и наблюдение за состоянием животных. В основной и контрольной группе животных выводили из эксперимента на 3, 5, 7, 10, 14 сутки. В те же сроки производили забор крови с целью определения количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы. Кроме того проводились исследования бактериального посева из раны для оценки динамики микробного загрязнения, заборы тканей из разных отделов раневого дефекта (центр и периферия). В дальнейшем выполняли световую микроскопию срезов тканей экспериментальной раны. В каждом препарате проводили исследования в нескольких полях зрения. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином.

Результаты и обсуждение. Анализ полученных данных показал что, на 14 сутки в контрольных группах сохранялись признаки воспаления раны, чего не отмечалось в основной группе. Полученные данные по результатам общего анализа крови и бактериологического посева показывали, что скорость снижения уровня лейкоцитов и микробного обсеменения в основной группе превосходила эти показатели в контрольных группах. Анализ данных морфологических исследований показал, что к 10-м суткам наблюдения в препаратах, взятых из раны в основной группе животных, отмечалось большое количество фибробластов и кровеносных сосудов и меньшее количество лейкоцитов, лимфоцитов, чем в контрольных. Скорость эпителизации была выше, чем в контрольных группах. Центр раны представлен созревающей грануляционной тканью, на поверхности которой небольшое количество нейтрофильных лейкоцитов. В глубоких слоях раны формируется соединительная ткань с большим количеством коллагеновых волокон и наличием гемосидерофагов. Мезенхимальные стволовые клетки жировой ткани представляют большой интерес для клеточной терапии. Известны ангиогенные и нейрогенные факторы, обуславливающие эффекты мезенхимальных клеток при регенерации. Мезенхимальные стволовые клетки жировой ткани (МСК-ЖТ) стимулируют восстановление поврежденных тканей благодаря секреции биологически активных факторов.

Выводы: из жировой ткани может быть получена клеточная фракция, имеющая следующие характеристики:

536

1.Преобладание клеток мезенхимального происхождения с фибробластной морфологией и фенотипическим сходством с мезенхимальными стволовыми клетками стромы костного мозга

2.Способность выживать in vitro без специфических сывороток или добавок в среду

3.Мультилинейный потенциал с дифференцировкой по адипогенной, остеогенной, хондрогенной, миогенной и нейрогенной линиям.

4.Линейный график роста клеточной популяции с незначительным старением клеток даже при длительном периоде культивирования.

При использовании мезенхимальных стволовых клеток для лечения гнойных ран отмечается более раннее купирование воспалительных признаков,

иускорение контракции раны на фоне комплексного лечения.Ускорение процесса эпителизации раны в основной группе животных с связи с функциональной активностью мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани, влияющих на скорость образования и созревания грануляционной ткани

ифибробластов посредством выделения ими ряда цитокинов и факторов роста. При использовании аллогенных мезенхимальных стволовых клеток в комплексном лечении гнойных ран отмечается более раннее купирование воспалительных признаков, и ускорение контракции раны на фоне комплексного лечения.

Литературные источники

1 Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики послеоперационных инфекций / Ю.К. Янов [и др.] // Вестн. хир. – 1997. – № 3. – С. 106–109.

2 Блатун Л. А. Местное медикаментозное лечение ран. Проблемы и новые возможности их решения / Л.А. Блатун // Сonsilium-medicum [Электронный ресурс].

3 Костюченко А.Л. Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса / А.Л. Костюченко, А.Н. Бельских, А.Н. Тулупов. – СПб.: Фолиант, 2000. – 448 с.

4 Стволовые клетки перспективы их применения в медицине/З.Б. Квачева, В.И.Вотяков,Л.П.Титов,Н.И.Мезен и др.//редакционная статья 2008 – С 4-6.

5 Zuk P.A..Zhu M..Mizuno H.et al.Multilineage cells from human adipose tissue:implications for cell-based therapies//Tissue Eng-2001-Vol 7 –p 211-226.

6 Kuo C.K. and Tuan R.S. Tissue engineering with mesenchymal stem cells// IEEE Eng. Med. Biol. Mag. – 2003. Vol. 22 (5). – P. 51-56.

S.I. Tretiak 1. E.B. Baranov 1, A. Sahab Haidar 1, M.K. Nedzved 1, E.S. Lobanok 2, I.B. Vasilevich 2, L.B. Butko 2

EFFECTIVENESS OF TRANSPLANTATION MESENCHYMAL STEM CELLS ADIPOSE TISSUE IN THE COMPLEX TREATMENT OF LONG –TERM HEALING OF

INFECTED WOUNDS IN EXPERIMENT

1 Belarusian State Medical University

2 "Institute of Biophysics and Cell Engineering," National Academy of Sciences of Belarus

Summary

Treatment of infected wounds is one of the important and not fully solved the problems of modern surgery. The frequency of surgical infection in the general structure of surgical diseases has remained at 35-45%, and in the structure of hospital infections in surgical wounds fester clinic is from 2-3% up to 11-62,2%. Despite the large number of proposed methods currently the treatment of infected wounds, remains relevant development and introduction into clinical practice more

537

efficient methods. Cell therapy in treatment of wound defects of various etiologies is a new method, in some cases surpassing the effectiveness of modern wound coverings. The obtained results give us an opportunity to improve treatment and quality of patients with infected wounds.

538

УДК 618.19-006.6-085.28:314

В.И. Троско, С.Л. Дудук, А.О. Хоров

СОЦИАЛЬНО-ДЕМОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЖЕНЩИН, СТРАДАЮЩИХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, В

ГРОДНЕНСКОЙ ОБЛАСТИ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Учреждение образования «Гродненский государственный медицинский университет», Гродно

Актуальность изучения рака молочной железы (РМЖ) объясняется неуклонным ростом частоты этого заболевания. РМЖ занимает первое место в структуре онкологической заболеваемости женщин, а статистические данные свидетельствуют об интенсивном росте заболеваемости данной патологией. РМЖ наиболее распространен в странах Европы (более 180 000 случаев в год) и США (более 130 000 случаев в год). Наибольший прирост случаев РМЖ наблюдается в Канаде, США, Швеции, Испании, Финляндии [1, 2]. В среднем число случаев регистрации РМЖ увеличивается в каждой стране на 1–2 %. Наименьшее число случаев приходится на Японию, в которой РМЖ встречается только в 12–15 случаях на 100 000 женщин [1, 2]. В Республике Беларусь (РБ) за последние 10 лет заболеваемость РМЖ возросла с 45,8 до 64,0 на 100 тыс. взрослого населения. По данным литературы отмечено наибольшее количество случаев регистрации РМЖ в возрасте 55 - 65 лет. В мире ежегодно регистрируется более 1 миллиона новых случаев РМЖ и более полумиллиона больных каждый год погибают от этого заболевания [1, 3]. Так в РБ за 2008 год РМЖ составил порядка 18% в структуре онкологических заболеваний, и было выявлено около 3500 новых случаев РМЖ [3, 4]. В общей структуре смертности от злокачественных новообразований в нашей стране удельный вес смертей от РМЖ составляет 6,8% [3, 4].

Цель работы – изучить социально-демографические характеристики женщин, страдающих РМЖ, которые проживают в Гродненской области РБ.

Материалы и методы. Объектом нашего исследования были 21 женщина с верифицированным диагнозом РМЖ (подтвержденным цитологически и/или гистологически), находящиеся на лечении на базе Гродненского областного онкологического диспансера в течение 2011 года.

Все женщины - жительницы Гродненской области РБ.

Специально для исследования была разработана анкета, которая включает: возраст, место жительства, место работы, профессию, образование, семейное положение, наличие детей, условия проживания, гинекологический анамнез, дату выставления диагноза, обстоятельства обнаружения заболевания и дату поступления в стационар. Перед заполнением анкеты с женщиной проводилась предварительная беседа с разъяснением цели исследования.

Анкетирование проводилось непосредственно в условиях стационара. Также были изучены данные амбулаторных карт и историй болезни

обследуемых пациенток.

Исследование является пилотным, планируется продолжение работы.

539

Результаты исследования. Все женщины заполнили предложенную анкету. По возрасту группа распределилась следующим образом: 7,7% женщин до 40 лет, 15,4% – от 41 до 50 лет, 30,8% – от 51 до 60, 46,1% – старше 60 лет.

Из этого следует, что РМЖ более чем в половине случаев страдают женщины трудоспособного возраста. 23,1% женщин проживают на селе, 76,9% – из города. 38,5% женщин к моменту выявления РМЖ находились на пенсии, 53,8% обследованных работают и только 1 женщина (7,7%) безработная. Высшее образование 38,4% (5 женщин), среднее специальное – 23,1% (3 обследованных), среднее – 38,5% (4 женщины). Было изучено семейное положение, результаты следующие: 61,5% – замужем, 15,4% – не замужем,

23,1% – вдовы.

При изучении данных амбулаторных карт все исследуемые женщины до поступления в стационар с диагнозом РМЖ наблюдались у маммолога с диагнозом «диффузная мастопатия обеих молочных желез». Длительность заболевания с момента установления диагноза РМЖ была различной: до 1 года

– 84,6 % обследованных, более 1 года – 15,4%.

Были прооперированы до момента проведения настоящего исследования 92,3% женщин, 7,7% подвергались только химиотерапевтическому лечению.

Сами обнаружили опухоль молочной железы 61,5% женщин, при профосмотре – 38,5% случаев.

Выводы: В результате исследования был получен следующий социальнодемографический портрет женщины, страдающей РМЖ: жительница города, трудоспособного возраста, в своем большинстве работающая, с образованием, замужем, при этом только в 39% случаев заболевание обнаружено при профосмотре, у 85% женщин операция по поводу РМЖ проведена уже в течение года после выявления заболевания.

Литературные источники

1.Economic evaluation of the prevention and treatment of breast cancer–present status and open issues / H. Imai [et al.] // Brest Cancer. - 2007. - Vol. 14 (1) - р. 81–87.

2.Stewart B., Klrihus P. World Health Organisation. World Cancer Report. International Agency on Research for Cancer // IARC Press - Lion, 2003 - Р. 188–190.

3.Злокачественные новообразования в Беларуси 1999 – 2008 / С.М. Поляков [ и др. ] / Под ред. И.В. Михайловой, И.В. Залуцкого. – Мн: РНПЦ МТ, 2009. – 205 с.

4.www.minzdrav.by

V.I. Trosko, S.L. Duduk, A.O. Khorov

THE SOCIAL AND DEMOGRAFIC CHARACTERYSTIC OF MOMEN SUFFERING FROM BREAST CANSER IN GRODNO REGION, THE REPUBLIC OF

BELARUS

Grodno State Medical University, Grodno

Summary

Breast cancer is the first in the structure of oncological morbidity of women. In Belarus the morbidity of breast canсer increased during last 10 years from 45,8 to 64,0 on 100000 of grown-up people. More often this desease starts in the age of 55-65 years. More than a million of cases are registed in the world and more than500000 die from this illness every year.

540