OBSchAYa_MIKROBIOLOGIYa_EKZAMEN

за 45 минут

( ПЕРВЫЕ 40 ВОПРОСОВ )

1. Антибиотики.

Классификация антибиотиков по источнику получения, способу получения, механизму, спектру и типу действия.

2

2. Бактериологический метод диагностики, его задачи и возможности.

Бактериологический метод: 1 – взятие материала больного 2 – выделение из него чистой культуры

3 – и её идентификация на основании изучения: -морфологических -тинкториальных -культуральных свойств -биохимических -антигенных

Цель бактериологического метода являются идентификация возбудителя,определение чувствительности к антибиотикам, внутривидовая идентификация (установление серовара, биохимического варианта, фаговара).

3

3. Бактериоскопический метод диагностики, его задачи и возможности.

Бактериоскопический метод: идентификация возбудителя на основании изучения его морфологических и тинкториальных свойств с учётом характера и места взятия материала.

Суть метода:

Из исследуемого материала по общепринятой методике готовят мазок, окрашивают его и путем микроскопического изучения обнаруживают микробы.

Далее исследуют их морфологические, тинкториальные свойства.

На сновании полученных данных делают заключение об этиологии

заболевания.

(*) Морфологические свойства 1) форма

2)размер

3)взаимное расположение микробных клеток

друг

относительно друга.

(*) Тинкториальные свойства: способность микроорганизмов окрашиваться в определенный

определённым методом.

Бактериоскопический метод чаще используется как ориентировочный,

предварительный метод исследования.

Бактериолог, получив ориентировочные сведения о предполагаемом возбудителе, его концентрации, сочетании с сопутствующей микрофлорой,

определяет тактику дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.

4

4. Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги. Лизогения.

Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис).

Взаимодействие фага с бактериальной клеткой.

По механизму взаимодействия различают вирулентные и умеренные фаги.

1) Вирулентные фаги

Проникнув в бактериальную клетку,они автономно репродуцируются в нейи вызывают лизис бактерий.

Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной степенью специфичности. По специфичности действия различают:

1.поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий.

2.моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериямиопределенного вида.

3.типовые фаги, взаимодействующие с отдельнымивариантами (типами) данного вида бактерий.

2) Умеренныефаги

Лизируют не все клетки в популяции, с частью из них онивступают в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосомубактерии. В таком случае геномом фага называют

ПРОФАГ.

Профаг, ставший частью хромосомы клетки, при ее размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу потомков.

Лизогения - биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом).

Лизогенная культура - культура бактерий, содержащая профаг. Это название отражает способность профага

самопроизвольно или под действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.

Фаговая конферсия – изменение свойств бактерии вследствие привнесения дополнительной генетической информации, привнесенной геномом профага.

(*) Кроме того, переходя изинтегрированного состояния в вирулентную форму умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту частьхромосомы в другую клетку.

Если микробная клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства.

Таким образом, умеренные фаги являютсямощным фактором изменчивости микроорганизмов.

5

5. Бактериофаги. Получение, титрование, использование.

Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис).

1. Выявление и идентификация.

Качественные пробы на Б. :

1.Проба Фюрта.

Врасплавленный остуженный материал вносят Х бактериофаг. Перемешивают, делят на сектора. Каждый сектор засевают заведомо известной культурой.

Инкубируют.

Отсутствие роста – следовательно есть бактериофаг.

2.Проба Отто.

(метод стекающей капли). На чашку с плотной пит. средой засевают заведомо известную

культуру и бактериофаг (который хотят обнаружить в заведомо известном материале).

Инкубируют.

Если в месте стекания капли нет роста бактерий, значит в исследуемом материале обнаружен бактериофаг, соответствующий данной культуре.

2. Титрование.

1. Метод Оппельмана на жидких питательных средах.

Позволяет определить титр бактериофага – наименьшее разведение, в котором содержится хотя бы 1 фаг.

Готовят 10кратные разведения фагосодержащего материала.

В каждую пробирку добавляют эталонную культуру(она должна соответствовать фагу)

Результат смотрят на следующий день:

1)пробирка прозрачная – есть бактериофаг (произошёл ЛИЗИС)

2)пробирка мутная – нет бактериофага.

(Титр– последняя прозрачная пробирка)

2. Титрование бактериофага вагаре по Грациа.

Позволяет определить индекс бактериофага –кол-во фаговых частиц в единице объёма.

Готовят 10кратные разведения фагосодержащего материала.

Из каждого разведения берут 1 мл.

Добавляют индикаторную культуру, перемешивают.

Выливают на чашку сплотной пит средой.

Каждая фаговая частица фиксируется в определенном месте, в процессе репродукции лизирует бактерии – образуется негативная колония фага– бляшка.

Считают бляшки и определяют кол-во бактериофагов в исследуемом материале.

6

3. Применение бактериофагов. a. Фаготерапия.

(пиобактериофаг, интестибактериофаг и.т.п.)

Фагопрофилактика

Фагодифференцировка – узнавание неизвестного возбудителя по лизису

известным бактериофагом.

(1. Х-культуру газоном засевают на МПА)

(2. Наносят индикаторный бактериофаг)

(3. Инкубируют)

(4. Результат учитывают по наличию стерильного пятна (ЛИЗИСА)) Если Х-культура лизируется бактериофагом– значит Х-культура соответствуетбактериофагу.)

Фаготипирование

Фаготип – перечень фагов,лизирующих данную культуру.

Это внутривидовой метод дифференцировки, используется для более точной идентификации возбудителя (Например, для выделения ИСТОЧНИКА).

Санитарно – показательные микроорганизмы.

Косвенный показатель вирусного загрязнения объекта окружающей среды.

Фагодиагностика

Если мы не можем обнаружить бактерию– можно попытаться получить бактериофаг. РНТФ (реакция нарастания титра фагов) – при развитии заболевания кол-во фагов будет увеличиваться.

6. Внутривидовое типирование бактерий. Методы. Использование в практике.

С целью выявления эпидемической цепочки заболевания, в т. ч. для обнаружения источника инфекции, осуществляют внутривидовую идентификацию бактерий, которая заключается в определениифаготипа, изучении антигенных и других свойств выделенных бактерий.

Фаготипирование — один из методов эпидемиологического маркирования. Применяется для выявления источника инфекции. Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения.

7

1)На чашку с плотной питательной средой газоном засевают чистую культуру возбудителя

2)Наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов.

3)Бактерии, чувствительные к фагу, лизируются (образуетсястерильное пятно,

«бляшку» или так называемую негативную колониюфага).

Через сутки после инкубации в термостате видны стерильные зоны отсутствия роста бактерий (стерильные «бляшки») врезультате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих бактерий.

7. Геном бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды наследуемой изменчивости.

Бактериальный геном состоитиз генетических элементов, способных к самостоятельной репликации, т. е. репликонов.

Репликонами являются бактериальная хромосома и плазмиды. Наследственная информация хранится у бактерий в форме последовательности

нуклеотидов ДНК, которые определяют последовательность аминокислот вбелке. Каждому белку соответствует свой ген (т. е. дискретный участок на ДНК, отличающийся числом и специфичностью последовательности нуклеотидов).

Бактериальная хромосома представлена одной двухцепочечной молекулой ДНК кольцевой формы.Размеры бактериальной хромосомы у различных представителей царства Procaryotae варьируют. Бактериальная хромосомаформируеткомпактный

нуклеоид бактериальной клетки. Бактериальная хромосома имеетгаплоидный набор генов. Она кодируетжизненно важные для бактериальной клетки функции. Плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК.

Они кодируют не жизненно важные функции, а функции,дающие бактерии преимущества

при попадании в неблагоприятные условия существования.

Свойства микроорганизмов, как и любых других организмов, определяются ихгенотипом, т.е. совокупностью генов данной особи.

Термин «геном» в отношении микроорганизмов— почти синоним понятия «генотип». Фенотип представляет собой результат взаимодействия между генотипом и окружающей средой, т. е. проявление генотипа в конкретных условиях обитания.

Воснове изменчивостилежит либоизменение реакции генотипа на факторы окружающей среды, либо изменение самого генотипа в результате мутации генов или их рекомбинации.

Всвязи с этим фенотипическую изменчивость подразделяют на наследственную и ненаследственную.

Ненаследственная (средовая, модификационная) изменчивость обусловлена влиянием внутри- и внеклеточных факторов на проявление генотипа. (Пример: О и Н форма протея)

Наследственная (генотипическая, мутационная) изменчивость. Основу мутации составляют изменения последовательности нуклеотидов в ДНК, полная или частичная их утрата,проявляющаяся фенотипически ввиде измененного признака.

Наследственная изменчивость, связанная срекомбинациями, называется

рекомбинационной изменчивостью.

Подвижные генетические элементы.

Всостав бактериального генома, как в бактериальную хромосому, так и в

плазмиды, входятподвижные генетические элементы.

8

К подвижным генетическим элементам относятся вставочные последовательностии

транспозоны.

Транспозоны —подвижные мигрирующие сегменты ДНК,способные к перемещению с одного участка хромосомы на другой и к рекомбинации с негомологичным сегментом ДНК.

Обеспечиваютсинтез молекул, обладающих специфическим биологическим свойством, например токсичностью, или обеспечивающих устойчивость к антибиотикам. Перемещаясь по репликону или между репликонами, подвижные генетические элементы вызывают:

1.Инактивацию генов тех участковДНК, куда они, переместившись, встраиваются.

2.Образование повреждений генетического материала.

3.Слияние репликонов, т. е. встраивание плазмиды в хромосому.

4.Распространение генов в популяции бактерий, что может приводить к изменению биологических свойств популяции, смене возбудителей инфекционных заболеваний, а также способствует эволюционным процессам среди микробов.

Изменения бактериального генома, а следовательно, и свойств бактерий могут происходить в результате мутаций и рекомбинаций.

8. Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Использование в практике.

Влияние физических факторов.

1) Влияние температуры.

Различные группы микроорганизмов развиваются приопределенных диапазонах температур.

Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) — мезофилами, при высокой — термофилами.

К психрофильным микроорганизмам относится большая группасапрофитов — обитателей почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, псевдомонады, светящиеся бактерии, бациллы). Некоторые из них могут вызывать порчу продуктов питания на холоде Некоторые патогенные бактерии: возбудитель псевдотуберкулеза.

В зависимости от температуры культивирования свойства бактерий меняются. Интервал температур, при котором возможен рост психрофильных бактерий, колеблется от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С.

Мезофилы включают основную группу патогенных и условно-патогенных бактерий. Они растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для большинства из них 37 °С.

При более высоких температурах (от 40 до 90 °С) развиваютсятермофильные

бактерии.

2)Высушивание.

Обезвоживание вызывает нарушение функций большинствамикроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гонореи, менингита, холеры, брюшного тифа,дизентерии и др.).

Более устойчивыми являются микроорганизмы,защищенные слизью мокроты. Высушивание под вакуумом из замороженного состояния— лиофилизацию — используют для продления жизнеспособности, консервирования

9

микроорганизмов. Лиофилизированные культуры микроорганизмов и иммунобиологические препараты длительно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.

2) Действие излучения.

Неионизирующее излучение — ультрафиолетовые и инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение —гамма-излучение радиоактивных веществ и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток времени.

УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различныхпредметов в больницах, родильных домах, микробиологических лабораториях.С этой целью используют бактерицидные лампы.

Ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой пластиковой микробиологической посуды, питательных сред, перевязочныхматериалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии,

устойчивые к действию ионизирующих излучений, например Micrococcus radiodurans была выделена из ядерного реактора.

Действие химических веществ.

Химические вещества могут оказыватьразличное действие на микроорганизмы: служить источниками питания,стимулировать или подавлять рост.

Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в окружающей среде,

называются дезинфицирующими.

Химические вещества, используемые для дезинфекции, относятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям. Антимикробным действием обладают такжекислоты и их соли (оксолиновая, салициловая, борная);щелочи (аммиак и его соли, Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке. (включая из споры)

Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании данного предмета. Как правило, при дезинфекции погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии.

Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану.

Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом.

9. Заслуги И.И. Мечникова в развитии микробиологии и иммунологии.

И.И.Мечников (1845-1916) – биолог (микробиолог, иммунолог, эмбриолог, цитолог, физиолог, патолог),лауреат Нобелевской премии в области физиологии и медицины

(1908).

Научные труды Мечникова относятся к ряду областей биологии и медицины. Мечников открыл фагоцитоз, разработал на его основе сравнительную патологию воспаления, а в дальнейшем – ФАГОЦИТАРНУЮ ТЕОРИЮ ИММУНИТЕТА.

10