OBSchAYa_MIKROBIOLOGIYa_EKZAMEN

Мечников доказал, что фагоцитоз– явление универсальное, наблюдается у всех животных, включая простейших, и проявляется по отношению ко всем чужеродным веществам (бактерии,органические частицы и т. д.). Теория фагоцитоза заложила

краеугольный камень клеточной теории иммунитета. За разработку теорий фагоцитоза И. И. Мечникову в 1908 г присуждена Нобелевская премия.

Многочисленные работы Мечникова по бактериологии посвящены вопросам эпидемиологии холеры, брюшного тифа, туберкулёза и др. инфекционных заболеваний. Мечников совместно сЭ. Ру впервые вызвал экспериментальносифилис у обезьян. Также Мечников является основателем научнойгеронтологии, один из основоположников эволюционной эмбриологии.

10. Иммерсионный микроскоп. Особенности устройства. Принцип действия. Использование в практике.

Иммерсионный микроскоп состоит из 2 частей:

1)оптической

2)механической

Оптическая часть:

1)Окуляр – система увеличивающих линз, дающих увеличение в 7, 10, 15 раз. 2)Объектив – система неравнозначных линз, главная из которых – ПЕРЕДНЯЯ ФРОНТАЛЬНАЯ ЛИНЗА, дающая увеличение в 90 раз. Она даёт искажения (аберрации):

а) сферические (лучи не пересекаются в 1 точке)

б) хроматические (разложение белого цвета на составные части). + 2 коррегирующие линзы – устраняющие аберрации.

3)Конденсор Аббе– система собиращих линз, находящихся под предметнрым столом. Нужен для концентрации светового потока, идущего от зеркала.

4)Зеркало – служит для направления световых лучей.

Между объектом и объективом – иммерсионное масло – оно необходимо для создания оптически однородной среды между объектом и объективом (показатели преломления масла и стекла примерно равны)

Таким образом, особенности иммерсионного микроскопа - это:

1)Специальный иммерсионный объектив с передней фронтальной линзой (ув. В 90 раз). 2)конденсор Аббе.

3)Использование иммерсионного масла.

11.История микробиологии. Этапы развития. Современные задачи.

1)Заслуга открытия микроорганизмов принадлежит голландскому натуралистуА. Левенгуку (1632-1723г.г.), создавшему первый микроскоп с увеличением в 300 раз. В 1695г. он издал книгу «Тайны природы» с рисунками кокков, палочек, спирилл. Это

11

вызвало большой интерес среди естествоиспытателей. Состояние науки того времени позволяло только описывать новые виды (морфологический период).

2)Начало физиологического периода связано с деятельностью великого французского ученого Луи Пастера (1822-1895г.г.). С именем Пастера связаны наиболее крупные открытия в области микробиологии:исследовал природу брожения, установил возможность жизни без кислорода(анаэробиоз),отверг теорию самозарождения, исследовал причины порчи вин, пива. Предложил действенные способы борьбы с возбудителями порчи продуктов (пастеризация),разработал принцип вакцинации и способы получения вакцин.

Р.Кох, современник Пастера, ввел посевы на плотные питательные среды, подсчет микроорганизмов, выделение чистых культур, стерилизацию материалов.

3)Иммунологический период в развитии микробиологии связан с именем российского биолога И.И. Мечникова, который открыл учение о невосприимчивости организма к инфекционным заболеваниям (иммунитет), явился родоначальником фагоцитарной теории иммунитета, раскрыл антагонизм у микробов. Одновременно с И.И. Мечниковым механизмы невосприимчивости к инфекционным болезням изучал крупнейший немецкий исследовательП. Эрлих, создавший теорию гуморального иммунитета.

Гамалея Н.Ф.– основоположник иммунологии и вирусологии, открыл бактериофагию.

Д.И. Ивановский впервые открыл вирусы и стал основоположником вирусологии. Работая в Никитском ботаническом саду над изучением мозаичной болезни табака, причинявшей огромный ущерб табачным плантациям, в 1892г. установил, что эта болезнь, распространенная в Крыму,вызывается вирусом.

Н.Г. Габричевский организовал первый бактериологический институт в Москве. Ему принадлежат труды по исследованию скарлатины, дифтерии, чумы и других инфекций. Он организовал в Москве производство противодифтерийной сыворотки и успешно применил ее для лечения детей.

П.Ф. Здродовский – иммунолог и микробиолог, известный своими фундаментальными работами по физиологии иммунитета, а также в области риккетсиологии и по бруцеллезу.

В.М. Жданов – крупнейший вирусолог, один из организаторов глобальной ликвидации натуральной оспы на планете, стоявший у истоков молекулярной вирусологии и генной инженерии.

М.П. Чумаков – иммунобиотехнолог и вирусолог, организатор института полиомиелита и вирусныхэнцефалитов, автор пероральной вакцины против полиомиелита.

А.А. Смородинцев – автор гриппозной, паротитной, коревой и полиомиелитной вакцин.

З.В. Ермольева – основоположник отечественной антибиотикотерапии

12

12. Клеточная стенка бактерий. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Кл стенка – облигатный органоид клеток бактерий. Функции:

1)Мех защита

2)Формообразование

3)Обмен веществ

4)Антигенность

5)Адгезивность

Выявление:

1)По Грамму (определение толщины пептидогликанового слоя)

1.генцианвиолет (син)

2.люголь (фиксирует окраску)

3.спирт 96 % - 5-10 сек.

ГРАММПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ

4.+ водный фуксин на 1 мин (красн)

ГРАММОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ

2) По Целю-Нильсону

(определение жировосковых свойств)

1. окр карболовый фуксин Целя (3-5 мин до нагревания)

2. диффундирующее вещество –

H2SO4 на 5-10 сек.

3. промыть водой

Смотрим: кислотоустойчивые– много липидов; неустойчивые(бесцветные)– мало.

4.Наносим метиленовый синий на 3-5-минут или генцианвиолет на 1-2 мин и промываем водой.

13

13. Клиническая микробиология, её задачи. Критерии этиологической диагностики.

Клиническая микробиология — это раздел медицинской микробиологии, изучающий взаимоотношения, складывающиеся между макро- и микроорганизмами в норме, при патологии, в динамике воспалительного процесса с учетом проводимой терапии до констатации клиницистом состояния клинического или полного выздоровления.

Задачи клинической микробиологии близки к тем задачам, которые стоят перед медицинской микробиологией. Их специфика определяется лишь тем, что клиническая микробиология исследует одну группу микробов (УМП),

одну группу заболеваний и одну антропогенную экосистему — больничные учреждения.

Исходя из этого, задачами клинической микробиологии являются:

1.Изучение биологии и роли УПМ в этиологии и патогенезе ГВЗ человека. 2. Разработка и использование методов микробиологической диагностики, специфической терапии и профилактики микробных заболеваний, встречающихся в неинфекционных стационарах.

3.Исследование микробиологических аспектов проблем ВБИ, дисбактериоза, лекарственной устойчивости микробов.

4.Микробиологическое обоснование и контроль за антимикробными мероприятиями в больничных стационарах.

http://vmede.org/sait/?page=6&id=Mikrobiologija_3verev_2010_t2&menu=Mikrobiologija_3ve rev_2010_t2– там подробно.

14

14. Методы культивирования вирусов. Вирусологический метод, основные этапы.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток,куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.

15.Методы микроскопического исследования (люминесцентная,темнопольная,фазово-контрастная,электронная микроскопия).

1. Темнопольный микроскоп.

Принцип основан на феномене Тиндаля (бокового освещения).

15

Особенность – специальный параболоид-конденсор под предметным столом (имеет затемненный центр и внутреннюю зеркальную поверхность) Достоинство: изучение живых неокрашенных объектов и их движение.

2. Фазово – контрастный микроскоп.

Основан на превращении амплитуды колебаний световых волн, которые глаз воспринимает плохо, в фазовые колебания, которые глаз воспринимает чётко.

Имеет: 1)Специальный фазовый объектив 2)Фазовую диафрагму под предмеиным столиком

Объекты – четкие.

Позволяет видеть натуральные, нативные препараты.

3. Люминисцентный микроскоп.

Основан на способности микроорганизмов окрашиваться специальным красителем (люминофор, флюорохром) и светиться под воздействием УФ лучей. (Светящиеся объекты глаз вомпринимает лучше).

Имеет:

1.вместо белого света – УФ

2.источник УФ-лучей – ртутно-кварцевая лампа

3.кварцевая оптика

4.фильтры а)отсекающие ненужную часть спектра б)защитные фильтры

4.Электронный микроскоп.

Достоинство: высокая разрешающая способность.

Недостатки: дорогой, громоздкий, требует специально обученный персонал. Имеет:

1.вместо света – поток электронов

2.источник электронов – электронная пушка

3.вместо линз – магнитные поля

4.изображение выводится на специальный экран

5.напыления солей тяжелых металлов на экран

6.разрешающая способность 0,25 * 10(-3) мкм.

16.Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

Чувствительность бактерий к антибиотикам определяется методом серийных разведений и методом стандартных дисков (диско-диффузионным

методом).

Диско-диффузионный метод = Метод стандартных дисков.

Используются стандартные бумажные диски, импрегнированных антибиотоком.

16

Принцип метода:

1)На чашку с плотной питательной средой засевают чистую культуру возбудителя.

2)Раскладывают стандартные антибиотические диски.

3)Инкубируют в термостате при температуре 35о-37оС .

4)Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате результат учитывают путем измерения диаметра зоны вокруг диска. Затем по специальным интерпретационным таблицам проводится классификация возбудителей по степени чувствительности к антибиотикам на чувствительные, умереннорезистентные и резистентные.

Метод серийных разведений.

1)Готовят двойные серийные разведения препарата

2)Вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие по 4 мл (или 9 мл) охлаждённого до 45 °С агара.

3)Содержимое пробирок вносят в чашки Петри ( процедуру проводят одной пипеткой с перенесением препарата от меньшей концентрации к большей).

4)Затем агар засевают исследуемой стандартизированной тест-культурой

(петлёй или специальным дозатором, засевающим чашку 36 видами различных микроорганизмов)

5)Инкубируют 18-20 ч при 37 "С.

После инкубации определяют МИК по отсутствию роста на чашках (пробирках), содержащих наименьшие концентрации препарата.

17.Механизмы передачи генетического материала у бактерий.

Конъюгация бактерий состоит впереходе генетического материала (ДНК) из клетки-донора в клетку-реципиентпри контакте клеток между собой. Переносимая ДНК взаимодействует с ДНК реципиента— происходит гомологичная рекомбинация. Прерывая процесс конъюгации бактерий, можно

17

определять последовательность расположения генов в хромосоме. При конъюгации происходит только частичный перенос генетического материала, поэтому ее не следует отождествлять полностью с половым процессом у других организмов.

Трансдукция — передача ДНК от бактерии-донора к бактерии-реципиенту при участии бактериофага.

Различаютнеспецифическую (общую)трансдукцию, при которой возможен перенос любого фрагмента ДНК донора, и специфическую — перенос определенного фрагмента ДНК донора только в

определенные участки ДНК реципиента. Неспецифическая трансдукция обусловлена включением ДНК донора в головку фага дополнительно к геному фага или вместо генома фага (дефектные фаги). Специфическая трансдукция обусловлена замещением некоторых генов фага генами хромосомы клеткидонора. Фаговая ДНК, несущая фрагменты хромосомы клетки-донора, включается в строго определенные участки хромосомы клетки-реципиента. Таким образом, привносятся новые гены и ДНК фага в виде профага репродуцируется вместе с хромосомой, т.е. этот процесс сопровождается лизогенией.

Трансформация – один из видов рекомбинаций, при которомфрагмент нативной ДНК клетки-донора поглощатся клеткой-реципиентом.

Путем трансформации могут быть перенесены различныепризнаки: капсулообразование, устойчивость к антибиотикам, синтез ферментов.

Изучение бактериальной трансформации позволило установитьроль ДНК как материального субстрата наследственности. При изучении генетической трансформации у бактерий были разработаны методы экстракции и очистки ДНК, биохимические и биофизические методы ееанализа.

18.Механизмы формирования и пути преодоления лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней.

Антибиотикорезистентность — это устойчивость микробов к антимикробным химиопрепаратам. Бактерии следует считать резистентными, если онине обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме. Резистентность может быть природной и приобретенной.

Природная устойчивость.

Некоторые виды микробов природно устойчивы копределенным семействам антибиотиков или в результате отсутствия соответствующей мишени(например, микоплазмы не имеют клеточной стенки,поэтому не чувствительны ко всем препаратам, действующим на этом уровне), или в результате бактериальной непроницаемостидля данного препарата (на-

пример,грамотрицательные микробы менее проницаемы для крупномолекулярных соединений, чем грамположительные бактерии, так как их наружная мембрана имеет «маленькие» поры).

Приобретенная устойчивость.

Приобретение резистентности — это биологическая закономерность, связанная с адаптацией микроорганизмов к условиям внешней среды.

Проблема формирования и распространения лекарственной

18

резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых так называемыми «госпитальными штаммами», у которых, как правило, наблюдается множественная устойчивость к антибиотикам (так называемая полирезистентность).

Генетические основы приобретенной резистентности.

Устойчивость к антибиотикам определяется и поддерживаетсягенами резистентности (r-генами) и условиями, способствующими их распространению в микробных популяциях.

Приобретенная лекарственная устойчивость может возникать и распространяться в популяции бактерий в результате:

•мутаций в хромосоме бактериальной клетки с последующейселекцией (т. е. отбором) мутантов.

Мутации возникают независимо от применения антибиотика,но сам препаратслужит фактором отбора.

•переноса трансмиссивных плазмид резистентности (R-плазмид).

Плазмиды резистентности (трансмиссивные) обычно кодируют перекрестную устойчивость к нескольким семействам антибиотиков. Некоторые плазмиды могут передаваться между бактериями разных видов, поэтому один и тот же ген резистентности можно встретить у бактерий, таксономически далеких друг от друга.

•переноса транспозонов, несущих r-гены (или мигрирующих генетических последовательностей). Транспозоны могут мигрировать с хромосомы на плазмиду и обратно, а также с плазмиды на другую плазмиду. Таким образом гены резистентности могут передаваться далее дочерним клеткам или при рекомбинации другим бактериям-реципиентам.

Реализация приобретенной устойчивости.Изменения в геноме бактерий приводят к тому, что меняются и некоторые свойства бактериальной клетки, в результате чего она становится устойчивой к антибактериальным препаратам. Обычно антимикробный эффект препарата осуществляется таким образом: агент должен связаться с бактерией и пройти сквозь ее оболочку, затем он должен быть доставлен к месту действия, после чего препарат взаимодействует с внутриклеточными мишенями. Реализация приобретенной лекарственной устойчивости возможна на каждом из следующих этапов:

•модификация мишени. Фермент-мишень может быть так изменен, что его функции не нарушаются, но способность связываться с химиопрепаратом (аффинность) резко снижается или может быть включен «обходной путь» метаболизма, т. е. в клетке активируется другой фермент, который не подвержен действию данного препарата.

•«недоступность» мишениза счет снижения проницаемости клеточной стенки и клеточных мембран или«эффлюко-механизма,когда клетка как бы «выталкивает» из себя антибиотик.

•инактивация препарата бактериальными ферментами. Некоторые

бактерии способны продуцировать особые ферменты, которые делают препараты неактивными (например, бета-лактамазы).

Бета-лактамазы — это ферменты, разрушающие бета-лактамное кольцо с образованием неактивных соединений. Гены, кодирующие эти ферменты, широко распространены среди бактерий и могут быть как в составе хромосомы, так и в составе плазмиды.

Для борьбы с инактивирующим действием бета-лактамаз используют вещества

— ингибиторы (например, клавулановую кислоту, сульбактам, тазобактам).

19

Эти вещества содержат в своем составе бета-лактамное кольцо и способны связываться с бета-лактамазами, предотвращая их разрушительное действие на бета-лактамы. При этом собственная антибактериальная активность таких ингибиторов низкая. Клавулановая кислота ингибирует большинство известных бета-лактамаз. Ее комбинируют с пенициллинами.

Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически невозможно, но необходимо использовать антимикробные препараты таким образом, чтобы не способствовать развитию и распространению устойчивости

(в частности, применять антибиотики строго по показаниям,избегать их использования с профилактической целью,через 10—15 дней антибиотикотерапии менять препарат, повозможности использовать препараты узкого спектра действия,ограниченно применять антибиотики в ветеринариии

не использовать их как фактор роста).

19.Микробиота желудочно-кишечноготракта человека.

1. Ротовая полость.

«+»: жидкая среда, много пит веществ, оптимальная температура и pH. «-»: бактерицидные свойства (лизоцим) и ферменты.

1.слюнной стрептококк

2.большая щёчная бактерия

3.зубная спирохета

20