
- •Глава 1. Структурная организация и принципы функционирования белков Основные проявления жизни - результат функционирования белков
- •Аминокислоты - главные составные части белков
- •Свойства аминокислот - основа свойств белков
- •Спектроскопические свойства аминокислот
- •Химические реакции
- •Методы разделения аминокислот
- •Аминокислота, полипептид, белок
- •Свойства белков определяются свойствами аминокислот
- •Знание иэт важно для разделения белков методом электрофореза
- •Гель-электрофорез
- •Белки выполняют роль буферных систем
- •Белки в воде образуют растворы с особыми свойствами
- •В пространственой структуре белков выделяют четыре уровня организации
- •Исследование первичной структуры белков и пептидов
- •Искусственный синтез белков и пептидов
- •Пространственная структура белковой молекулы
- •Вторичная структура белков
- •Третичная структура белков
- •Четвертичная структура белков
- •Белки чувствительны к внешним воздействиям
- •Для определения количества белков используют разные подходы
- •Белки классифицируются разными способами
- •Простые белки построены только из аминокислот
- •Сложные белки содержат небелковые компоненты
- •Глава 2. Ферменты Клинико-лабораторное значение
- •Немного истории
- •В основе классификации ферментов - тип катализируемой реакции
- •Элементы химической логики
- •В основе химических реакций лежит образование и разрыв химических связей
- •У химической реакции есть скорость и порядок
- •На пути к пониманию механизма действия фермента
- •Ферменты – биологические катализаторы белковой природы
- •Методы выделения и очистки ферментов - это методы выделения и очистки белков.
- •Пример вычисления активности фермента:
- •Для работы некоторых ферментов необходимы дополнительные небелковые соединения
- •Белковая природа определяет многие свойства ферментов
- •Повышение температуры неоднозначно влияет на активность фермента
- •Ферменты характеризуются высокой специфичностью
- •Активность фермента зависит от концентрации субстратов.
- •Важной качественной характеристикой фермента является константа Михаэлиса
- •Уравнение Михаэлиса и Ментен графически – прямоугольная гипербола
- •Примеры использования данных кинетических исследований ферментов в медицине
- •Кинетика мультисубстратных реакций
- •Скорость реакции зависит от концентрации фермента
- •Химические реакции протекают медленно
- •Ферменты превосходят другие катализаторы своей молекулярной активностью. Почему?
- •Группы активного центра фермента используют обычные химические принципы катализа
- •Реакции, катализируемые ферментами – основной объект, на который направлено действие регуляторов процессов жизнедеятельности
- •Активность ферментов можно тормозить (ингибировать)
- •Ингибиторы бывают разные: обратимые и необратимые
- •Обратимые ингибиторы могут быть конкурентными и неконкурентными
- •Конкурентные ингибиторы не всегда структурно подобны субстрату.
- •Конкурентные ингибиторы не влияют на Vmax, они понижают Км.
- •Принципы конкурентного торможения находят применение в медицинской практике.
- •Смешанные неконкурентные ингибиторы
- •Кинетика смешанных неконкурентных ингибиторов
- •Неконкурентные ингибиторы не могут связаться со свободным ферментом.
- •Неконкурентных ингибиторы неактивны при низких концентрациях субстрата.
- •Торможение продуктом реакции- пример конкурентного торможения.
- •Субстрат может быть ингибитором фермента
- •Кинетика многих ферментов не подчиняется принципам кинетики Михаэлиса и Ментен
- •У аллостерических ферментов особые свойства
- •Две модели объясняют механизмы аллостерии.
- •В основе связывания субстрата - индуцированное взаимодействие.
- •Изменение конформации одной субъединицы индуцирует изменения структуры другой
- •Какая гипотеза является правильной?
- •Ферменты неравномерно распределены внутри клеток
- •Доступность субстрата или кофактора - важный элемент регуляции активности ферментов
- •Нарушение функции фермента вызывает болезнь.
- •Энзимопатии следствие ошибок в синтезе белков.
- •Исследование активности ферментов помогает врачу в диагностике болезней.
- •Некоторые примеры использования измерения активности ферментов в диагностике
- •Определение концентрации субстратов возможно при помощи ферментов.
- •Ферменты можно использовать как лекарственные препараты.
- •Рибозимы –исключение , подтверждающее правило.
- •Методы молекулярной инженерии позволяют конструировать новые ферменты
- •Глава 3. Витамины
- •Классификация витаминов
- •Нарушение баланса витаминов в организме
- •Потребность организма человека в витаминах.
- •Причины дисбаланса витаминов в организме.
- •Межвитаминные взаимоотношения
- •Витамин в1 (Tиамин. Антиневритный витамин)
- •Витамин в2(Рибофлавин).
- •Пантотеновая кислота (витамин в3).
- •Витамин рр (Витамин в5 , никотиновая кислота, никотинамид, ниацин). Антипеллагрический витамин.
- •Гомоцис- Серин Цистатионин α-кетобутират Цистеин
- •Фолиевая кислота (Фолацин. Витамин в9. Витамин вс).
- •Фолиевая кислота
- •Метилен-тгфк- Метилен-тгфк-
- •Биотин (витамин н).
- •Пропионил-КоА метилмалонил-КоА
- •Метилмалонил-КоА пируват пропионил-КоА оксалацетат
- •Витамин с (аскорбиновая кислота), антицинготный
- •Остаток глутаминовой кислоты Остаток γ-карбоксиглутаминовой кислоты
- •Рибосомы на мембране эндо-
- •Сигнальный пептид
- •Витаминоподобные соединения Витамин f (эссенциальные жирные кислоты)
- •Инозит(Витамин в8)
- •Карнитин
- •Липоевая кислота (витамин n)
- •Пара-Аминобензойная кислота.
- •Витамин u
- •Холин (витамин в4).
- •Ацетилхолинэстераза н2о
- •Глава 4. Введение в термодинамику Биомедицинское значение.
- •Биоэнергетика- составная часть термодинамики
- •Функции состояния системы.
- •Первый закон термодинамики утверждает энергия вселенной не исчезает
- •Второй закон термодинамики указывает на вероятность и направление процесса
- •Свободная энергия и концентрация. Стандартное состояние в биологических реакциях.
- •Изменение свободной энергии и константа равновесия.
- •Примеры вычисления констант равновесия и изменений свободной энергии
- •Сопряженные реакции лежат в основе многих химических процессов в клетке.
- •«Энергетической валютой» клетки является атф
Примеры использования данных кинетических исследований ферментов в медицине
Во вступлении к этому разделу были указаны причины, побудившие обратиться за помощью семейную пару, ожидавшую ребенка. У беременной были получены клетки плода (путем амниоцентеза) и размножены методом тканевой культуры. Экстракт клеток был использован в качестве источника фермента. Результаты приведены в таблице 2-4.
Табл.2-4. Результаты исследования активности фермента в экстрактах клеток обследуемой беременной в сравнении с активностью фермента контрольных клеток.
[S] |
V(Контр) А |
V(Иссл) В |
0,5 |
3,1 |
2 |
1 |
4,8 |
3,4 |
2,5 |
5,8 |
4,55 |
5 |
6,5 |
5,4 |
10 |
6,8 |
5,9 |
20 |
7 |
6,2 |
30 |
7,1 |
6,3 |
Скорость реакции при различных концентрациях субстрата (ферментативная активность) меняется, как показано на рис 2-8а. Воспользуемся графиком Лайнуивера –Берка для отображения полученных данных (рис 2-8b)
Рис 2-8.Графическое выражение данных исследования активности фермента в обычной форме (а) и методом двойных обратных величин (b)
Значения Vmax и Km определяются при экстраполяции линий до пересечения с осью абсцисс и ординат. Как видно исследуемый фермент отличается по значению Км от Км контрольного фермента более высокими значениями, что может свидетельствовать о более низком сродстве этого фермента к субстрату и возможном дефекте фермента .
При обследовании больного подагрой обнаружено значительное (в три раза выше нормы) повышение выделяемой почками мочевой кислоты. Уровень 5'-фосфорибозил-
-пирофосфата (ФРПФ) в эритроцитах был заметно увеличен. Активность синтетазы ФРПФ в эритроцитах была почти в три раза выше нормы, однако определение количества фермента (по белку) в эритроцитах не выявило отклонения от нормы. После изучения кинетических параметров этого фермента оказалось, что Км фермента не отличалась от значений «нормального» фермента, ноVmax была в три раза выше нормы. Это позволило сделать заключение о том, что исследуемый фермент при сохранении способности связываться с субстратом, имеет изменения каталитического звена ферментативной реакции. Связывание с субстратом и катализ - два взаимосвязанных, но отдельных звена в функции фермента. Результаты кинетических исследований направили врача на поиск возможных причин нарушения регуляции активности этого фермента.
Некоторые люди обладают повышенной чувствительностью к этиловому спирту. После приема даже небольших количеств этилового спирта у них развивается тахикардия и покраснение лица. Этиловый спирт под влиянием алкогольдегидрогеназы превращается в уксусный альдегид, который в свою очередь затем окисляется под влиянием альдегиддегидрогеназы в уксусную кислоту. Альдегиддегидрогеназа обычно существует в двух формах, с высоким сродством (низкие значения Км) к альдегиду и с низким сродством (высокие значения Км) к альдегиду. У людей, чувствительных к этиловому спирту отмечен недостаток формы с высоким сродством и уксусный альдегид, накапливаясь, вызывает у них вазодилятацию и покраснение лица.