2. Методы определения вирулентности, единицы. Генетический контроль патогенности и вирулентности.

Изучая болезнетворные бактерии либо получая живые вакцины, определяют степень их патогенности, или вирулентность. Выражают вирулентность Dim (Dosis letalis minima) или DL50, т.е. минимальным количеством бактерий, вызывающих полную или частичную (50 %) гибель животных соответствующего вида.

Для определения Dlm культуры бактерий с плотных питательных сред смывают изотоническим раствором натрия хлорида. Полученную маточную суспензию разводят этим же раствором до таких пределов, чтобы ее мутность соответствовала производственному стандарту мутности, содержащему строго определенную концентрацию микробных тел. Культуру на жидких средах разводят в пептонной воде. Для этого ее наливают по 1,8 мл в ряд пробирок. В первую из них вносят 0,2 мл исходной бульонной взвеси бактерий и методом последовательного переноса этого объема из пробирки в пробирку получают десятикратно уменьшающиеся концентрации. Полученные взвеси разведения по 0,2 мл вводят внутрибрюшинно 2 - 3 белым мышам массой 18-20 г. S. pneumoniae относят к вирулентным, если мыши погибают через 36 - 48 ч. Минимальная смертельная доза резко варьирует в зависимости от вида и штамма возбудителя, места его введения, а также от массы животного. Как показатель вирулентности LD₅₀ более информативный, так как в очень малой степени зависит от индивидуальной чувствительности животных. Его определяют, вводя 5-6 животным серийные десятикратные разведения бактерий или вирусов.

Поскольку трудно подобрать точную дозу, которая бы вызвала гибель 50 % взятых в опыт животных, применяют метод статистического учета и вычисления LD₅₀. При исследовании культуры, разведенной от 10^-1 до 10^-8, требуется 8 групп животных. Прекратив наблюдения, отмечают количество погибших животных в каждой группе и при помощи специальных таблиц определяют LD₅₀. Вирулентность бактерий в большой мере обусловливается выработкой ими экзо- и эндотоксинов, сила которых определяется теми же Dlm и LD₅₀.

Единицы измерения вирулентности: Dlm – Dosis letalis minima, LD50, Dcl – Dosis certa letalis (100%),

ID – инфицирующая доза (количество возбудителя, способное вызвать инфекционный процесс в его явной форме, т.е. инфекционное заболевание).

Чаще используется LD50 - 50% летальная доза - количество патогенных микроорганизмов, позволяющая вызвать гибель 50% зараженных животных. Все они вычисляются по одинаковому принципу, хорошо иллюстрирующемуся определение 1 DLM для дифтерийного токсина: минимальное его количество, которое при внутрибрюшинном заражении морской свинки массой 250-300 г вызывает ее гибель на 4 сутки. На практике вирулентность всегда измеряют на группе подопытных животных и, как видно из приведенного определения, при этом учитывают четыре фактора, от которых зависит величина вирулентности: способ заражения, вид животного, вес животного, время наступления гибели животного (50% взятых в опыт животных – при вычислении LD50, 95% – при вычислении DLM и 100% при вычислении DCL).