1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

2. Секундомер;

3. Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл;

4. Сыворотка крови;

5. Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза  50 Е/л, пероксидаза  1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

6. Стандарт (Холестерол 5,2 ммоль/л);

7. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Уровни холестерола важны в диагностике и классификации гиперлипопротеинемий.

Концентрация холестерина в сыворотке указывает на работу печени, билиарного тракта, всасывание в кишечнике.

Высокие концентрации холестерина говорят об угрозе ишемической болезни сердца, о нарушении тиреоидной функции и заболеваниях надпочечников.

Определение концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови

Принцип метода: Холестерол липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) определяют после осаждения из сыворотки липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП, соответственно). Супернатант содержит холестерол, связанный с ЛПВП в растворенной форме и определяется ферментативным методом для определения концентрации общего холестерола.

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в ЛПВП.

Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови –  0,9 ммоль/л (37С).

Оборудование и реагенты:

1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

2. Секундомер;

3. Автоматические пипетки на 10 мкл, 400 мкл , 2 мл и 1000 мкл;

4. Сыворотка крови;

5. Осаждающий реагент (хлорид магния, 100 ммоль/л в ортофосфорной кислоте, 30,3 ммоль/л)

6. Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза  50 Е/л, пероксидаза  1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

7. Стандарт (Холестерол 1,2 ммоль/л);

8. Дистиллированная вода.

Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям.

Величины содержания холестерола в ЛПВП  0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Аланинаминотрансфераза (АЛТ) катализирует обратимое трансаминирование L-аланина в L-глутамат с образованием пировиноградной кислоты. Далее пировиноградная кислота под действием лактатдегидрогеназы (ЛДГ) восстанавливается до D-лактата с одновременным окислением НАДН до НАД⁺.

Кинетическое спектрофотометрическое определение активности АЛТ основано на регистрации падения оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм. Скорость снижения оптической плотности пробы при длине волны 340 нм прямо пропорциональна активности АЛТ в ней.

Линейность метода: 4-280 Е/л.

Норма: мужчины –  41 Е/л (37С);

женщины –  31 Е/л (37С).

АЛТ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 24 часов, при замораживании (-20С) в течение 3 месяцев.

Оборудование и реагенты: