1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

2. Секундомер;

3. Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл;

4. Сыворотка крови;

5. Дистиллированная вода;

6. Рабочий реагент (L-лактат – 50 ммоль/л, НАД⁺ – 7,0 ммоль/л, ТРИС-буфер (рН 9,00,1)).

Клинико-диагностическое значение: Активность ЛДГ в сыворотке крови повышается при различных заболеваниях (инфаркт миокарда, лейкозы, заболевания почек, инфекционный мононуклеоз, повреждение паренхимы печени, мышечные дистрофии, опухолевые новообразования).

Из-за отсутствия органной специфичности ЛДК в диагностике чаще применяют определение активности ее изоферментов, чем общую активность ЛДГ.

Общая активность ЛДГ в сыворотке при инфаркте миокарда достигает максимума через 24-36 часов после начала болевого приступа, но приходит к норме медленнее, по сравнению с КК и АСТ, на 8-10 день.

Увеличение активности в сыворотке изофермента ЛДГ1 специфично для поражения миокарда. Для заболеваний скелетной мускулатуры характерно повышение изофермента ЛДГ5. Заболевания печени сопровождаются разными изоферментными спектрами ЛДГ: для острого гепатита характерно резкое увеличение ЛДГ5 и ЛДГ4 и уменьшение ЛДГ1 и ЛДГ2; при циррозе увеличена активность ЛДГ5; при холецистите активность ЛДГ5 увеличена незначительно.

В опухолевых тканях преобладают изоформы ЛДГ5 и ЛДГ4. При лейкозах обнаружена корреляция активности ЛДГ2 и ЛДГ3 от количества незрелых клеток.

Определение содержания триацилглицеролов сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Метод определения триацилглицеролов (ТАГ) основан на реакции их гидролитического расщепления под действием фермента липазы. Высвободившийся глицерол далее ферментативно окисляется с образованием перекиси водорода. Перексид водорода реагирует с хромогеном под действием пероксидазы с образованием окрашеного хинонимина.

Интенсивность образующейся окраски прямо пропорциональна содержанию триацилглицеролов в пробе.

Линейность метода: до 11,4 ммоль/л.

Норма: 0,6 – 2,3 ммоль/л.

Триацилглицеролы в негемолизированной сыворотке сохраняют стабильность при температуре хранения 2-8С в течение нескольких дней.

Оборудование и реагенты:

1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

2. Секундомер;

3. Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл;

4. Сыворотка крови;

5. Дистиллированная вода;

6. Рабочий реагент (АТФ – 1 ммоль/л, 4-аминоантипирин – 0,4 ммоль/л, глицеролфосфатоксидаза (ГФО) –  2000 Е/л, липаза – 200 000 Е/л, глицеролкиназа (ГК) –  6000 Е/л, пероксидаза –  500 Е/л в буфере);

7. Калибратор – калибровочный раствор триацилглицеролов, 2,28 ммоль/л.

Клинико-диагностическое значение: ТАГ определяют для типирования эссенциальных гиперлипопротеинемий. Например, гиперлипопротеинемия типа  отличается высоким уровнем холестерина в сыворотке по сравнению с типом , для которой характерно высокие уровни холестерина и ТАГ.

Повышение уровня ТАГ в сыворотке бывает и при других заболеваниях (переломы костей, нефротический синдром, гипотиреоз, алкоголизм), но диагностического значения в этих случаях не имеет.

Иногда, при несвоевременном заборе биоматериала, можно обнаружить алиментарную гипертриглицеридемию, характеризующуюся высокими концентрациями ТАГ после приема жирной пищи.

Определение концентрации общего холестерола в сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Эфиры холестерола под действием фермента холестеролэстеразы распадаются на холестерол и жирные кислоты. Холестерол окисляется холестеролоксидазой с образованием перекиси водорода. Пероксид водорода реагирует с хромогеном с образованием окрашенного вещества (хинонимин):

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в нем.

Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови –  5,2 ммоль/л (37С).

Оборудование и реагенты: