![](/user_photo/2706_HbeT2.jpg)
- •Лекция 3.12 Эндонуклеазы рестрикции
- •Рестриктазы - номенклатура и характеристика.
- •Рестрикционные карты.
- •Расщепление днк рестриктирующими эндонуклеазами
- •Проведение расщепления днк рестриктазами
- •Примечания
- •Краткое описание наиболее часто используемых стандартных препаратов днк
- •100 Bp Plus 1,5 Медиген Маркер мол. Веса днк (0,2 мг/мл), 0.1 мг
- •Фирма Axygen
Проведение расщепления днк рестриктазами
Реакционная смесь обычно содержит 0,2-1 мкг ДНК в объеме 20 мкл или менее.
1. Добавьте воду к раствору ДНК в стерильной пробирке фирмы Эппендорф до объема 18 мкл и перемешайте.
2. Добавьте 2 мкл соответствующего буфера 10-кратной концентрации и перемешайте, слегка постукивая по пробирке пальцем.
3. Добавьте 1 ед. рестриктазы и перемешайте, слегка постукивая по пробирке пальцем. (1 ед. Фермента – это количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК за 1 ч в определенном буфере и при определенной температуре в объеме 20 мкл. Как правило, расщепление рестриктазами, проводимое в течение более длительных периодов времени или при избытке фермента, не приводит к осложнениям, если в препарате фермента отсутствуют примеси ДНКазы или экзонуклеазы. В имеющихся в продаже препаратах рестриктаз такие примеси обнаруживаются редко.)
4. Инкубируйте смесь при подходящей температуре в течение необходимого времени.
5. Остановите реакцию добавлением 0,5 М ЭДТА, рН 7,5, до конечной концентрации 10 мМ.
Если ДНК анализируют сразу в геле, добавьте 6 мкл красителя в буфере для нанесения I, перемешайте смесь встряхиванием и нанесите расщепленную ДНК на гель.
Если обработанная рестриктазой ДНК нуждается в очистке, экстрагируйте ее один раз смесью фенол-хлороформ, один раз хлороформом и осадите этанолом.
Примечания
Рестриктазы – дорогие ферменты! Связанные с ними затраты могут быть
сведены к минимуму, если следовать приведенным ниже правилам.
А. Чтобы отобрать небольшое количество фермента из упаковки с концентрированным раствором рестриктазы, быстро коснитесь кончиком стеклянной микропипетки разового пользования (на 5 мкл) поверхности раствора фермента. Таким способом можно отобрать всего 0,1 мкл раствора фермента.
Б. Рестриктазы стабильны при хранении при –20оС в буфере, содержащем 50% глицерин. При проведении расщепления ДНК растриктазами приготовьте реакционную смесь, содержащую все компоненты, кроме фермента. Достаньте из морозильника фермент и сразу же поместите его в лед. Работайте как можно быстрее, чтобы фермент находился вне морозильника минимальное время. Сразу же после использования поместите фермент обратно в морозильник.
В. Используйте минимальные объемы реакционной смеси, уменьшая в ней
количество воды, насколько это возможно. Проверьте, однако, чтобы объем внесенной рестриктазы составлял менее 1/10 конечного объема реакционной смеси, иначе активность фермента может ингибироваться глицерином.
Г. Когда ДНК необходимо обработать двумя или более рестриктазами, реакцию можно проводить одновременно при условии, что оба фермента функционируют в одном и том же буфере. В противном случае первым следует использовать фермент, функционирующий в буфере с более низкой ионной силой. После этого в реакционную смесь можно добавить необходимое количество соли и второй фермент (ферменты) и продолжить инкубацию.
Краткое описание некоторых ферментов рестрикции
Название |
Aat II |
Сайт узнавания |
GACGT↑C C↓TGCAG | |||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген Aat II из Acetobacter aceti | |||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | |||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | |||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.) | |||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| |||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | |||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | |||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | |||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | |||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | |||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | |||||||||||||||
Литература: |
Sugisaki H., Maekawa Y., Kanazawa S., Takanami M. Nucleic Acid Res. 10:5747-5752(1982) | |||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Длины фрагментов на дорожке 13273, 10739, 9980, 1945 ДНК аденовируса-2 |
|
Название |
| |||
Кат. номера |
E025 |
E026 | ||
Фасовки, е.а. |
500 |
2500 | ||
Концентрация, е.а./мл |
5000-10000 |
5000-10000 | ||
Цена, руб (без налогов) |
700 |
2800 | ||
Добавить в корзину |
|
|
Сайт узнавания |
GCCNNNN↑NGGC CGGN↓NNNNCCG | ||||||||||||
Источник |
Bacillus globigii | ||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
2W (20 mM Tris-HCl (pH 8,5 при 25°C); 10 mM MgCl2;; 200 mM NaCl; 1 mM DTT) | ||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности | ||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): GCCWGGNNGGC | ||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | ||||||||||||
Примечание |
Избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер 2W. |
Название |
|
Сайт узнавания |
G↑ANTC CTNA↓G | ||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген HinfI из Haemophilus influenzae | ||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | ||||||||||
Инактивация 20 мин при |
80oC | ||||||||||
Примечание |
С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер O. |
Название |
|
Сайт узнавания |
A↑AGCTT TTCGA↓A |
| |||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген HindIII из Haemophilus influenzae Rd | ||||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) + BSA | ||||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | ||||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
80oC | ||||||||||||||||
Примечание |
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W, BSA. | ||||||||||||||||
Литература: |
Old,
R., Murray, K., Roizes, G. J. Mol. Biol. 92: 331-339 (1975).
| ||||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Длины фрагментов на дорожке 15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000 Маркер
|
|
|
Название |
| ||||||||||||||||
Сайт узнавания |
G↑AATTC CTTAA↓G | ||||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген EcoR I из Escherichia coli | ||||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
SE-буфер EcoRI(100 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) +BSA | ||||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 40-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | ||||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | ||||||||||||||||
Примечание |
При большом избытке фермента, при использовании неоптимального буфера возможно появление звездчатой активности. Длительная инкубация c BSA не рекомендуется из-за появления звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер EcoRI, BSA. | ||||||||||||||||
Литература: |
Albertsen,
H.M., Le Paslier, D., Abderrahim, H., Dausset, J., Cann, H.,
Cohen, D. Nucleiv Acids Res. 17: 808 (1989).
| ||||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Длины фрагментов на дорожке 15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000 Маркер
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322
|
Название |
| |||||
Кат. номера |
E021 |
E022 |
E021X |
E022X | ||
Фасовки, е.а. |
4000 |
20000 |
4000 |
20000 | ||
Концентрация, е.а./мл |
20000 |
20000 |
50000 |
50000 | ||
Цена, руб (без налогов) |
750 |
3000 |
750 |
3000 | ||
Добавить в корзину |
|
|
|
|
Сайт узнавания |
G↑GATCC CCTAG↓G | ||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген BamHI из Bacillus amyloliquefaciens H | ||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) +BSA | ||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
Не блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC) :GGATCC. | ||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | ||||||||||||||
Примечание |
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G, BSA. | ||||||||||||||
Литература: |
Wilson, G.A. and Young, F.E. J. Mol. Biol. 97: 123-125 (1975). Roberts, R.J., Wilson, G.A., Young, F.E. Nature 265: 82-84 (1977) | ||||||||||||||
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции. Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить |
Начало формы
Конец формы | ||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окна Длины фрагментов на дорожке 14332, 10679, 6203, 4723 ДНК аденовируса-2 Close |
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Название |
|
Сайт узнавания |
G↑GATCC CCTAG↓G | ||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген BamHI из Bacillus amyloliquefaciens H | ||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) +BSA | ||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
Не блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC) :GGATCC. | ||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | ||||||||||||||
Примечание |
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G, BSA. | ||||||||||||||
Литература: |
Wilson, G.A. and Young, F.E. J. Mol. Biol. 97: 123-125 (1975). Roberts, R.J., Wilson, G.A., Young, F.E. Nature 265: 82-84 (1977) | ||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Длины фрагментов на дорожке 15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000 Маркер Длины фрагментов на дорожке 16841, 7233, 6771, 6527, 5626, 5504 ДНК фага Лямбда
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке 16841, 7233, 6771, 6527, 5626, 5504 ДНК фага Лямбда
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке 14332, 10679, 6203, 4723 ДНК аденовируса-2
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке 2686 PUC19
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке 4361 PBR322
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Название |
|
Сайт узнавания |
GGTAC↑C C↓CATGG | ||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген KpnI из Klebsiella pneumonia | ||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | ||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.) +BSA | ||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| ||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | ||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | ||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина cпецифического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
Не блокируется при перекрывании Dсm-метилированием (CmCWGG):GGTACCWGG. | ||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
80oC | ||||||||||||||
Примечание |
Длительная инкубация с BSA не рекомендуется . Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер B, BSA. | ||||||||||||||
Литература: |
Smith,
D.I., Blattner, F.R., Davies, J. Nucleic Acids Res. 3: 343-353
(1976).
| ||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке 15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000 Маркер
|
M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322 |
Название |
| |||
Кат. номера |
E059 |
E060 | ||
Фасовки, е.а. |
2000 |
10000 | ||
Концентрация, е.а./мл |
20000 |
20000 | ||
Цена, руб (без налогов) |
630 |
2520 | ||
Добавить в корзину |
|
|
Сайт узнавания |
GAT↑ATC CTA↓TAG | |||||||||||||||
Источник |
Из штамма Е.coli несущего клонированный ген EcoRV из Escherichia coli | |||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | |||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | |||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) + BSA | |||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| |||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | |||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин;Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | |||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | |||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | |||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | |||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
80oC | |||||||||||||||
Примечание |
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. Не рекомендуется использовать BSA при длительной инкубации. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W, BSA. | |||||||||||||||
Литература: |
Холмина
В., Ребентиш Б.A., Скоблов Ю.С., и др.
Докл. Акад. Наук СССР 253: 495-497 (1980).
| |||||||||||||||
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции. Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить |
Начало формы
Конец формы | |||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окна Длины фрагментов на дорожке Close |
|
Название |
Sal I | |
Кат. номера |
E115 |
E116 |
Фасовки, е.а. |
2000 |
10000 |
Концентрация, е.а./мл |
20000 |
20000 |
Цена, руб (без налогов) |
1680 |
6720 |
Добавить в корзину |
|
|
Сайт узнавания |
G↑TCGAC CAGCT↓G | |||||||||||||||
Источник |
Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sal I из Streptomyces albus | |||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда (HindIII-digest) | |||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | |||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | |||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| |||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | |||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | |||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК pUC19 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | |||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | |||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | |||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | |||||||||||||||
Примечание |
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер O. | |||||||||||||||
Литература: |
Arrand, J.R., Myers, P.A., Roberts, R.J., J. Mol. Biol. 118: 113-122 (1978). | |||||||||||||||
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции. Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить |
Начало формы
Конец формы | |||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Длины фрагментов на дорожке 32744, 15259, 499 ДНК фага Лямбда
|
M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322
|
Название |
BssT1 I | |
Кат. номера |
E207 |
E208 |
Фасовки, е.а. |
1000 |
5000 |
Концентрация, е.а./мл |
10000-20000 |
10000-20000 |
Цена, руб (без налогов) |
330 |
1320 |
Добавить в корзину |
|
|
Сайт узнавания |
C↑CWWGG GGWWC↓C | |||||||||||||||
Источник |
Bacillus stearothermophilus T1 | |||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | |||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. | |||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
2K (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 200 mM KCl; 1 mM DTT.) | |||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| |||||||||||||||
Оптимальная температура |
60oC | |||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | |||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | |||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 60°С. | |||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | |||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
80oC | |||||||||||||||
Примечание |
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер 2K | |||||||||||||||
Литература: |
Серов Г.Д., Терещенко T.A., Пучкова Л.И., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х., Неопубликованные данные. | |||||||||||||||
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции. Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить |
Начало формы
Конец формы | |||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окна Длины фрагментов на дорожке 15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000 Маркер Close |
|
Название |
Erh I | |
Кат. номера |
E061 |
E062 |
Фасовки, е.а. |
1000 |
5000 |
Концентрация, е.а./мл |
10000-50000 |
10000-50000 |
Цена, руб (без налогов) |
420 |
1680 |
Добавить в корзину |
|
|
Сайт узнавания |
C↑CWWGG GGWWC↓C | |||||||||||||||
Источник |
Erwinia rhapontici | |||||||||||||||
Субстрат для определения активности |
ДНК фага лямбда | |||||||||||||||
Единица активности |
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | |||||||||||||||
Оптимальный SE-буфер |
2W (20 mM Tris-HCl (pH 8,5 при 25°C); 10 mM MgCl2;; 200 mM NaCl; 1 mM DTT) + BSA | |||||||||||||||
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: |
| |||||||||||||||
Оптимальная температура |
37oC | |||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке | |||||||||||||||
Лигирование |
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. | |||||||||||||||
Неспецифический гидролиз |
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 50 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | |||||||||||||||
Чувствительность к метилированию |
не проверялось | |||||||||||||||
Инактивация 20 мин при |
65oC | |||||||||||||||
Примечание |
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер 2W, BSA. | |||||||||||||||
Литература: |
Жилкина O.A., Речкунова Н.И., Семенченко Г.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1994). | |||||||||||||||
Построить диаграмму расщепления участка ДНК по Вашему выбору с помощью данной эндонуклеазы рестрикции. Введите в окно справа последовательность, состоящую из литер A, G, T, C и N длиной не менее 50 и не более 50 тысяч символов и нажмите кнопку Отправить |
Начало формы
Конец формы | |||||||||||||||
Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК: Для просмотра длин фрагментов наведите курсор на дорожку. Вы можете скопировать данные, если необходимо, из всплывающего окна Длины фрагментов на дорожке 19328, 7743, 6223, 4255, 3472, 2690, 1882, 1489, 925, 421, 74 ДНК фага Лямбда Close |
|