Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Гусейнов / Лекция 3.12 Рестриктазы нo.docx
Скачиваний:
116
Добавлен:
10.06.2015
Размер:
713.28 Кб
Скачать

Краткое описание наиболее часто используемых стандартных препаратов днк

Название

ДНК фага лямбда

Источник

Выделена из бактериофага Лямбда cI857S7 который был индуцирован температурой из лизогенного штамма E.coli несущего системы метилирования Dam, Dcm

Описание

Двухцепочечная линейная ДНК длиной 48502 пары оснований. Молекулярный вес - 31.5х106 дальтон

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

Название

ДНК фага T7

Источник

Выделена из бактериофага Т7 который получен из инфицированого штамма E.coli с неактивными системами метилирования Dam, Dcm

Описание

Двухцепочечная линейная ДНК длиной 39936 пар оснований. Молекулярный вес 26х106 дальтон.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl; (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

Название

ДНК pUC19

Источник

Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилирования Dam, Dcm

Описание

Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 2686 пар оснований. pUC19 несет полилинкер длиной 54 пары оснований и состоящий из сайтов 13ти рестриктаз узнающих гексануклеотидные палиндромные последовательности. Молекулярный вес - 1.75х106 дальтон

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pUC19 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pUC19 гидролизованная HindIII (0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма

Название

ДНК pBR322

Источник

Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилировная Dam, Dcm

Описание

Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 4361 пар оснований. pBR322 содержит гены устойчивости к ампицилину и тетрациклину. Молекулярный вес - 2.83х106 дальтон.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pBR322 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pBR322 гидролизованная FauNDI(0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма

Название

ДНК pHspAI2/GsaI

Источник

pHspAI2 выделена из штамма E.coli (dam+, dcm+) с использованием стандартной методики

Описание

Субстрат pHspAI2/GsaI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI2, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции GsaI.   pHspAI2 (4118 п.о.) является модификацией плазмиды pHspAI1. Помимо фрагмента геномной ДНК бактериального штаммаHaemophilus speciesA1, включающего ген ДНК-метилтрансферазы M.HspAI, pHspAI2 содержит единственный канонический сайт узнавания GlaI.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С

Краткое описание наиболее часто используемых стандартных маркеров ДНК

Название

ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (11 фрагментов от 50 до 1000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид, гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов, пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 8.0); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+50bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp (10 фрагментов от 100 до 1000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 10 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp + 1.5 Kb (11 фрагментов от 100 до 1500 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+ 1,5Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp+1.5 Kb+3 Kb (12 фрагментов от 100 до 3000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+ 1,5Kb+ 3Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле

Название

ДНК-маркеры 1 Kb (13 фрагментов от 0.25 до 10 Kb)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 13 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 1Kb ДНК маркера в 1 % ТАЕ агарозном геле

Название

pUC19/Msp I

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pUC19/MspI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

pUC19/Kzo9 I (Sau3AI)

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Kzo9 I с образованием 15 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

955

141

46

12

585

105

36

11

341

78

18

8

258

75

17

 

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pUC19/Kzo9I ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

pBR322/BsuR I (HaeIII)

Описание

Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом BsuR I с образованием 22 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

587

234

104

21

540

213

89

18

502

192

80

11

458

184

64

8

434

124

57

 

267

123

51

 

Условия хранения

10 mM Tris-HCl(pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

Название

pBR322/Alu I

Описание

Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом Alu I с образованием 9 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

908

521

257

659

403

226

656

281

100

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl.. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pBR322/AluI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле

Название

pUC19/Msp I

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

501

331

147

67

489

242

111

34

404

190

110

26