
- •Лекция 3.12 Эндонуклеазы рестрикции
- •Рестриктазы - номенклатура и характеристика.
- •Рестрикционные карты.
- •Расщепление днк рестриктирующими эндонуклеазами
- •Проведение расщепления днк рестриктазами
- •Примечания
- •Краткое описание наиболее часто используемых стандартных препаратов днк
- •100 Bp Plus 1,5 Медиген Маркер мол. Веса днк (0,2 мг/мл), 0.1 мг
- •Фирма Axygen
Краткое описание наиболее часто используемых стандартных препаратов днк
Название |
ДНК фага лямбда |
Источник |
Выделена из бактериофага Лямбда cI857S7 который был индуцирован температурой из лизогенного штамма E.coli несущего системы метилирования Dam, Dcm |
Описание |
Двухцепочечная линейная ДНК длиной 48502 пары оснований. Молекулярный вес - 31.5х106 дальтон |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С. |
Название |
ДНК фага T7 |
Источник |
Выделена из бактериофага Т7 который получен из инфицированого штамма E.coli с неактивными системами метилирования Dam, Dcm |
Описание |
Двухцепочечная линейная ДНК длиной 39936 пар оснований. Молекулярный вес 26х106 дальтон. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl; (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С. |
Название |
ДНК pUC19 |
Источник |
Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилирования Dam, Dcm |
Описание |
Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 2686 пар оснований. pUC19 несет полилинкер длиной 54 пары оснований и состоящий из сайтов 13ти рестриктаз узнающих гексануклеотидные палиндромные последовательности. Молекулярный вес - 1.75х106 дальтон |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С. |
1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pUC19 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pUC19 гидролизованная HindIII (0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма |
|
Название |
ДНК pBR322 |
Источник |
Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилировная Dam, Dcm |
Описание |
Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 4361 пар оснований. pBR322 содержит гены устойчивости к ампицилину и тетрациклину. Молекулярный вес - 2.83х106 дальтон. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С. |
1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pBR322 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pBR322 гидролизованная FauNDI(0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма |
|
Название |
ДНК pHspAI2/GsaI |
Источник |
pHspAI2 выделена из штамма E.coli (dam+, dcm+) с использованием стандартной методики |
Описание |
Субстрат pHspAI2/GsaI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI2, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции GsaI. pHspAI2 (4118 п.о.) является модификацией плазмиды pHspAI1. Помимо фрагмента геномной ДНК бактериального штаммаHaemophilus speciesA1, включающего ген ДНК-метилтрансферазы M.HspAI, pHspAI2 содержит единственный канонический сайт узнавания GlaI. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С |
Краткое описание наиболее часто используемых стандартных маркеров ДНК
Название |
ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (11 фрагментов от 50 до 1000 bp) |
Описание |
Представляет собой смесь специальных плазмид, гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов, пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 8.0); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку. |
1 мкг 100bp+50bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле. |
|
Название |
ДНК-маркеры 100 bp (10 фрагментов от 100 до 1000 bp) |
Описание |
Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 10 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку. |
1 мкг 100bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле. |
|
Название |
ДНК-маркеры 100 bp + 1.5 Kb (11 фрагментов от 100 до 1500 bp) |
Описание |
Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку. |
1 мкг 100bp+ 1,5Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле. |
|
Название |
ДНК-маркеры 100 bp+1.5 Kb+3 Kb (12 фрагментов от 100 до 3000 bp) |
Описание |
Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку. |
1 мкг 100bp+ 1,5Kb+ 3Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле |
|
Название |
ДНК-маркеры 1 Kb (13 фрагментов от 0.25 до 10 Kb) |
Описание |
Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 13 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку. |
1 мкг 1Kb ДНК маркера в 1 % ТАЕ агарозном геле |
|
Название |
pUC19/Msp I |
Описание |
Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. |
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С. |
Примечание |
Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. |
1 мкг pUC19/MspI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле. |
|
Название |
pUC19/Kzo9 I (Sau3AI) |
Описание |
Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Kzo9 I с образованием 15 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. | ||||||||||||||||||||
Длины фрагментов |
| ||||||||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С. | ||||||||||||||||||||
Примечание |
Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. | ||||||||||||||||||||
1 мкг pUC19/Kzo9I ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле. |
|
Название |
pBR322/BsuR I (HaeIII) |
Описание |
Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом BsuR I с образованием 22 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. | ||||||||||||||||||||||||||||
Длины фрагментов |
| ||||||||||||||||||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl(pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С. | ||||||||||||||||||||||||||||
Примечание |
Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. |
Название |
pBR322/Alu I |
Описание |
Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом Alu I с образованием 9 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. | ||||||||||||
Длины фрагментов |
| ||||||||||||
Условия хранения |
10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl.. Хранить при - 20°С. | ||||||||||||
Примечание |
Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. | ||||||||||||
1 мкг pBR322/AluI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле |
|
Название |
pUC19/Msp I |
Описание |
Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе. | ||||||||||||||||
Длины фрагментов |
|