19 Лабораторная работа

Гемолиз. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Время жизни эритроцитов колеблется от 100 до 120 дней, затем происходит их гемолиз и полный распад. Различные факторы могут ускорить процессы разрушения электроцитов.

19.1 Цель работы: проследить за развитием гемолиза эритроцитов под влиянием повреждающих факторов с разным механизмом действия. Определить максимальную и минимальную границы резистентности эритроцитов к воздействию осмотического фактора - раствора хлорида натрия различной концентрации.

19.2 Приборы и оборудование: микроскоп, штатив с пятью пробирками, пипетки на 1 и 5 мл, глазные пипетки, предметные и покровные стекла, стеклянная палочка, 1%-ный раствор NaCl, 0,1%-ный раствор NaСl, нашатырный спирт, дистиллированная вода, 5%-ный (изотонический) раствор глюкозы, цитратная кровь, штатив с центрифужными пробирками, стеклянная палочка, глазная пипетка, спирт этиловый.

19.3 Ход работы.

Изучение разных видов гемолиза.

Нумеруют 5 пробирок и ставят их в штатив. В пробирки наливают по 5 мл: в 1-ю - 1 % раствор NaCl; 2-ю - дистиллированную воду; 3-ю - 0,1%-ного раствора NaCl; 4-ю - 4 мл 1 % раствора NaCl и 1 мл нашатырного спирта; 5-ю - 5%-ного раствора глюкозы.

В каждую пробирку вносят по 3 капли крови. Все пробирки встряхивают и ставят в штатив на 5 минут.

Рассматривают пробирки в проходящем свете и обращают внимание на степень окраски жидкости, ее прозрачность, наличие осадка.

2. На трех предметных стеклах помещают по одной капле цитратной крови. К первой капле добавляют каплю 1%-ного раствора NaCl; второй - 0,1%-ного раствора NaСl или дистиллированной воды; к третьей - 5%-ного водного раствора аммиака. После этого накрывают капли покровными стеклами и наблюдают за состоянием эритроцитов под микроскопом.

Определить наличие или отсутствие гемолиза в пробирках, на предметных стеклах. Дать анализ полученным результатам и описать механизм гемолиза в каждой пробирке.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Готовят растворы NaCl различной концентрации из 1 % раствора NaCl и дистиллированной воды по ниже следующей схеме.

Таблица 19.1 Схема заполнения пробирок.

№ пробирок	1% р - р NaCl, мл	Н2О, мл	Концентрация NaCl, %	Окраска р-ра после центрифугирования	Осадок эритроцитов	Уровень резистентности
	0,9	0,1
	0,8	0,2
	0,7	0,3
	0,6	0,4
	0,5	0,5
	0,4	0,6
	0,3	0,7
	0,2	0,8

В каждую пробирку пипеткой вносят по 2 капли цитратной крови, взятой не более чем за 3 ч до опыта, хорошо перемешивают и оставляют на 3 - 5 минут. Затем все пробирки центрифугируют в течение 1 минуты при 2000 оборотов/мин.

Контрольные вопросы

1. Дайте определения понятиям "осмотическое давление крови", "онкотическое давление крови".

2. Какой раствор называется гипертоническим, изотоническим, гипотоническим?

3. Что такое физиологический раствор?

4. Какие изменения происходят с эритроцитами и лейкоцитами в гипертоническом растворе?

5. Какие изменения происходят с эритроцитами и лейкоцитами в гипотонических растворах?

6. Что такое гемолиз?

7. Каковы отличительные признаки гемолизированной крови от негемолизированной?

8. Перечислите виды гемолиза и назовите причины его возникновения.

9. Перечислите факторы, вызывающие биологический гемолиз, и укажите его механизм.

10. Дайте определение понятию "осмотическая резистентность эритроцитов".

11. Каким путем поддерживается постоянство осмотического давления плазмы крови и эритроцитов?

12. Какие ионы плазмы понижают резистентность эритроцитов, а какие - повышают?