МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВО РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
|
Кафедра инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы
С2. Б.11 ветеринарная микробиология и микология
Лабораторная работа. Лабораторная диагностика микозов и микотоксикозов
Специальность 111801 Ветеринария
Уфа 2013
УДК637.12.04/.07:378.147
ББК 36.95+74.58
А.65
Рекомендовано к изданию методической комиссией факультета ветеринарной медицины (протокол № 2 от « 04 » сентября 2013 г.)
Составитель: профессор, д-р биол. наук А. В. Андреева
доцент, канд. биол. наук З. З. Ильясова
Рецензент: заведующий кафедрой морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней, д-р ветеринар. наук Гимранов В.В.
|
Ответственный за выпуск: |
зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д. б. н., профессор Андреева А.В. |
г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы
Лабораторная работа №15
Лабораторная диагностика микозов и микотоксикозов.
Цель занятия: Ознакомить студентов со свойствами возбудителей. Методами микробиологического исследования и этапами лабораторной диагностики трихофитии, микроскопии, эпизоотического лимфангита, а также с характеристикой микотоксинов, вызывающих микотоксикозы, грибами-продуцентами этих токсинов и методами исследований для постановки диагноза на микотоксикозы.
Оборудование и материалы. Культуры грибов родов Mucor, Aspergillus, Candida на плотной питательной среде Сабуро или др.; плакаты, таблицы; биопрепараты.
1 Общие сведения
Возбудители дерматомикозов (стригущего лишая и парши). Относят к несовершенным грибам к порядку Hyphomycetales, родам Trichophyton, Microsporum и Achorioti.
1.1ТРИХОФИТИЯ характеризуется появлением облысевших участков кожи, в первую очередь в области головы, затем поражение может распространиться дальше по поверхности тела животного. В зоне пораженных участков волос хрупкий, ломкий, отторгающиеся чешуйки эпидермиса иногда слипаются в виде корочек. На концах оставшихся волос заметны серовато-белые «чехлы» (споры гриба).
Возбудитель трихофитии рода Trichophyton (tricho - волос, phytum - растение). Основные виды трихофитона Т. faviforme, T. verrucosum вызывают заболевание преимущественно у молодняка крупного рогатого скота и овец, реже у лошадей, собак, верблюдов; Т. equinum — возбудитель лишая лошадей (1...2 % случаев); Т. gypseum, Т. mentagrophytes — основные возбудители трихофитии у мышей, крыс, собак, кроликов, кошек, морских свинок, пушных зверей, редко лошадей, крупного рогатого скота.
Лабораторные исследования. Для лабораторного исследования делают соскоб пораженного эпидермиса с захватом волос на границе со здоровой тканью. Готовые препараты из патологического материала микроскопируют. При сомнительном результате делают посев на плотную среду Cабуро. Предварительно соскобы обрабатывают 10 %-м раствором щелочи (КОН или NaОH) в течение 15..30 мин. Препаровальной иглой (или бактериологической петлей) несколько волосков переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом. Иглу (или петлю) следует сразу хорошо прокалить на пламени горелки. Приготовленный препарат («раздавленная капля») микроскопируют под объективом сухой системы средней степени увеличения. На пораженном волосе внутри и снаружи его отчетливо видны расположенные рядами круглые, хорошо преломляющие свет короткие гифы мицелия гриба (споры).
Культивирование. Для выделения чистых культур материал после десятиминутной обработки 5...10%-м раствором щелочи промывают стерильным физиологическим раствором при центрифугировании. Обломки волосков длиной 1...2 см переносят на агар Сабуро в 8...10 пробирок и располагают их на расстоянии 1 см друг от друга. Культивируют при 26...28°С в аэробных условиях. Из-за сильной загрязненности патологического материала в питательную среду добавляют пенициллин и стрептомицин по 100...200ЕД/мл.
Время появления и характер роста колоний зависят от вида гриба - возбудителя дерматомикоза.
1.2 СТРИГУЩИЙ ЛИШАИ, вызванный грибом рода Microsporum, по клиническому проявлению не отличается от трихофитии, за исключением того, что волосы на пораженных участках кожи головы, ног обламываются ближе к поверхности кожи. К микроспории восприимчивы кошки, собаки, лошади, пушные звери, обезьяны, тигры, а также человек (особенно дети). Взятие патологического материала, порядок его исследования такие же, как при трихофитии.
Различают три вица данного рода гриба: Microsporum lanosun, M. eqinum M.gypseun
Микроскопия. В культурах гриб микроспорум имеет мицелиальную форму. Мицелий септирован, многоклеточный, почти такой же, как и мицелий трихофитона, отличие только в пораженном волосе: гриб располагается не рядами, а беспорядочно разбросан, обычно в виде «сотообразных» скоплений.
Необходимо проводить дифференциацию трихофитона и микроспорума ввиду различного их антигенного строения.
Люминесцентная диагностика микроспории. Осуществляют с помощью ПРК- 4 с фильтром Вуда в темном помещении. При наличии возбудителя последний обнаруживают по характерному зеленоватому свечению под действием ультрафиолетового излучения (возбудители трихофитии не флуоресцируют). Возможна идентификация видов и родов возбудителей трихофитии и микроспории методом флуоресцирующих антител.
Различие в антигенном строении разных видов дерматомицетов имеет значение в создании профилактических специфических биопрепаратов. Биологическая промышленность выпускает вакцину для иммунизации животных против стригущего лишая с использованием культуры гриба Т.faviforme (вакцина ЛТФ-130).
Биопроба. Микроспорию можно воспроизвести у морских свинок, кроликов путем втирания культуры возбудителя или патологического материала в скарифицированную кожу.