Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Биохимия мочи.doc
Скачиваний:
564
Добавлен:
22.05.2015
Размер:
247.81 Кб
Скачать

6. Качественные реакции на кетоновые тела в моче:

а) проба Легаля

Принцип метода:

Метод основан на способности ацетона и ацетоацетата в щелочной среде образовывать с нитропруссидом натрия комплексы оранжево-красного цвета, превращающиеся при подкислении раствора в соединения вишнево-красного цвета. Проба более чувствительна к ацетоуксусной кислоте, чем к ацетону, с b-оксибутиратом реакция не идет.

ХОД РАБОТЫ

В пробирку вносят 0,5 мл мочи, добавляют 0,1 мл нитропруссида натрия и 0,2 мл раствора гидроксида натрия, появляется оранжево-красное окрашивание. Вносят в пробирку 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты. При наличии ацетоновых тел появляется вишнево-красное окрашивание. Если ацетон отсутствует, то при подкислении окрашивание переходит в желтое.

б) проба Либена

Принцип метода:

Метод основан на способности ацетона в щелочной среде образовывать желтый осадок йодоформа, обладающего специфическим запахом.

ХОД РАБОТЫ

В пробирку вносят 1 мл мочи, добавляют 0,1 мл раствора гидроксида натрия и затем 0,1 мл раствора Люголя до слабо-желтой окраски раствора. При наличии ацетона жидкость мутнеет вследствие выделения бледно-желтого осадка йодоформа, обладающего характерным запахом.

7. Количественное определение кетоновых тел в моче с помощью тест- полосок «Кетофан»

Принцип метода:

Тест основан на реакции Легаля. Реактивная зона содержит щелочной буфер и нитропруссид натрия, который вступает в реакцию с ацетоацетатом или ацетоном, следствием чего является образование продукта, окрашенного в фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству кетоновых тел в пробе. Тест чувствителен к ацетоацетату, реагирует на его присутствие в моче в концентрации 0,3-0,5 ммоль/л. Тест менее чувствителен к ацетону и не чувствителен к β-оксибутирату.

ХОД РАБОТЫ

Из пенала упаковки берут полоску, не прикасаясь руками к зонам индикации. Опускают полоску на 1-2 секунды в исследуемую жидкость, лишнюю жидкость удаляют, проводя полоской по краю сосуда, и через 1 минуту сравнивают со шкалой, находящейся на этикетке упаковки.

8. Качественная реакция на желчные пигменты - проба Гмелина с концентрированной азотной кислотой

Принцип метода:

Билирубин в моче при взаимодействии с концентрированной HNO3 окисляется. На границе раздела жидкостей (кислота–моча) появляются

продукты окисления в виде окрашенных колец: биливердин- зеленое, билицианин – синее, холетелины – от красного до желтого.

ХОД РАБОТЫ

К 1мл мочи подслаивают 1 мл концентрированной азотной кислоты, так, чтобы жидкости не смешивались. На границе раздела двух сред при наличии билирубина появляются цветные кольца.

9. Количественное определение уробилиногена в моче с помощью тест- полосок «убГфан»

Принцип метода:

В основе реакции азосочетания стабилизированной диазониевой соли с уробилиногеном в кислой среде. Реактивная зона меняет цвет в присутствии уробилиногена на розовый или красный. Тест специфичен для всех уробилиногеновых тел. Чувствительность 3-4 мг/л (5,1 – 6,8 мкмоль/л).

Оценка теста: положительным считается тест при изменении цвета тест- зоны в течение первых 60 секунд. Эта окраска визуально сравнивается со шкалой, отдельные цвета которой соответствуют следующим концентрациям уробилиногена: 17 – 51 – 102 – 203 мкмоль/л.

ХОД РАБОТЫ

Тест - полоску погружают в исследуемую мочу, затем высушивают на воздухе и сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой.